核酸类药物生化制药技术.pptVIP

***核酸类药物生化制药技术**第1页，共24页，星期日，2025年，2月5日概述核酸类药物分为两类：一类为具有天然结构的核酸类物质,这类药物已广泛用于放射病(Co60)、血小板减少症、白细胞减少症、慢性肝炎、心血管疾病等，属于这一类的核酸类药物有ATP、辅酶A、脱氧核苷酸等。第二类为天然结构碱基、核苷、核苷酸结构类似物或聚合物，这类药物是当今人类治疗病毒、肿瘤、艾滋病的重要手段，也是产生干扰素、免疫抑制的临床药物，主要有三氟胸苷、叠氮胸苷、阿糖腺苷等。反义核酸技术及反义药物：反义技术是用人工合成的或生物中自然存在的寡聚核苷酸片断（反义DNA和反义RNA），结合目标基因或mRNA特定序列(靶核酸)，从而有效地抑制或封闭基因的转录与翻译。反义药物能与特定基因杂交，在基因水平干扰致病蛋白的产生过程，即干扰遗传信息从核酸向蛋白质的传递。**第2页，共24页，星期日，2025年，2月5日概述核酸是由许多核苷酸以3’，5’-磷酸二酯键连接而成的大分子化合物。核苷酸由碱基、戊糖和磷酸三部分组成，碱基和戊糖组成的单元叫核苷。核酸类药物包括核酸、核苷酸、核苷、碱基及其衍生物。依据化学结构和组成分四大类：1核酸碱基及其衍生物2核苷及其衍生物3核苷酸及其衍生物4多核苷酸（C）（U）（T）腺嘌呤（A）鸟嘌呤（G）β-D-核糖β-2-D-脱氧核糖**第3页，共24页，星期日，2025年，2月5日核酸的生产方法酶解法～是先用糖质原料、亚硫酸纸浆废液或其他原料发酵生产酵母，再从酵母体中提取核糖核酸（RNA），提取出的核糖核酸经过青霉属或链霉属等微生物产生的酶进行酶解，制成各种核苷酸。半合成法～即微生物发酵和化学合成并用的方法。例如由发酵法先制成5-氨基4-甲酰胺咪唑核苷（AICAR），再用化学合成制成鸟苷酸。又如用发酵法先制成肌苷，再利用微生物的或化学的磷酸化作用，使肌苷转变为肌苷酸。**第4页，共24页，星期日，2025年，2月5日**第5页，共24页，星期日，2025年，2月5日核苷酸的制备核酸(RNA主要存在于微生物中，如啤酒酵母、纸浆酵母以及多种抗生素的菌丝体；DNA主要存在于动物内脏等)经酶、酸、碱水解生成核苷酸，然后分离提取制备各种核苷酸的方法通称水解核酸法。用催化剂的不同，分为酶水解、酸水解和碱水解等。(1)酶水解最常用的酶有桔青霉A.S3.2788产生的5’—磷酸二酯酶，也可用红酵母发酵所产生的3’—磷酸二酯酶。**第6页，共24页，星期日，2025年，2月5日核苷酸的制备（2）碱水解法在稀碱条件下，RNA容易水解得到2’—核苷酸和3’—核苷酸。实际上这是由于稀碱水解过程中，先形成一个中间环状物2’，3’环状核苷酸，它很不稳定，进一步水解生成2’和3’—核苷酸。稀碱水解的浓度随温度和作用时间的不同而异。用1M氢氧化钾或氢氧化纳在80℃下作用1h能使RNA水解成单核苷酸；用0.3M氢氧化钾或氢氧化纳在37℃下作用，要16h。**第7页，共24页，星期日，2025年，2月5日从微生物中提取RNA是工业上最实际和有效的方法。一些最常见的菌体含有丰富的核酸，如酵母、白地霉、多中抗菌素（青梅素、制霉菌素等）的菌丝体。通常在细菌中RNA占5～25%，在酵母中占2.7～15%，在霉菌中占0.7～28%。菌体内RNA含量的变化受培养组成影响，其中关键是铵离子浓度和磷酸盐浓度。培养酵母菌体收率高，易于提取RNA。在许多酵母中，早期细胞中的RNA含量高，其确切数值取决于C、H比例和培养基组成等。RNA来源**第8页，共24页，星期日，2025年，2月5日RNA的制备组织匀浆冷酸处理残留物酸溶性小分子有机溶剂处理脂溶性物质残留物酸处理碱处理酸提取液（RNA）残留物（DNA）上清液（RNA等）沉淀物（DNA，蛋白质等）**第9页，共24页，星期日，2025年，2月5日实例**第10页，共24页，星期日，2025年，2月5日提取与纯化乙醇沉淀法提取去污剂沉淀法酚法纯化：密度梯度离心法柱色谱法凝胶电泳法**第11