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生物实验员岗位面试问题及答案

如何正确使用和维护PCR仪？

答案：使用PCR仪前，需检查仪器外观是否完好，电源连接是否正常。设置程序时，严格按照实验要求设定温度、时间和循环次数等参数。实验结束后，及时清理仪器内部残留的样本和试剂，定期对仪器进行校准和保养，如清洁热盖、检查温度传感器等，以确保仪器的准确性和稳定性。

请说明SDS电泳实验的原理和操作关键步骤？

答案：SDS电泳实验原理是利用SDS（十二烷基硫酸钠）使蛋白质变性并带上负电荷，消除蛋白质本身电荷和形状的影响，仅根据蛋白质分子量大小在聚丙烯酰胺凝胶中进行分离。操作关键步骤包括：配制合适浓度的分离胶和浓缩胶；制备样品，将蛋白质与SDS等缓冲液混合并加热变性；上样，将处理好的样品加入凝胶孔中；电泳，设定合适的电压和时间进行电泳；染色和脱色，常用考马斯亮蓝染色，通过脱色显现蛋白质条带，以便观察和分析。

如何进行无菌操作以保证细胞培养的成功率？

答案：在进行细胞培养的无菌操作时，首先要确保操作环境的无菌，如使用超净工作台，提前开启紫外灯照射30分钟以上进行消毒，操作前用75%酒精擦拭台面。操作人员需穿戴无菌工作服、口罩和手套，并用酒精对手部进行消毒。所有接触细胞的器具和试剂都必须经过灭菌处理，如玻璃器皿高温高压灭菌，培养液等采用过滤灭菌。操作过程中，尽量减少空气流动，避免不必要的动作，防止外界微生物污染细胞。

阐述高效液相色谱（HPLC）的主要组成部分及各部分作用？

答案：高效液相色谱（HPLC）主要由高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统和数据处理系统组成。高压输液系统用于将流动相以稳定的流速输送到色谱柱中；进样系统负责将样品准确地注入到流动相中；分离系统即色谱柱，是实现样品各组分分离的关键部件；检测系统用于检测分离后的样品组分，并将其转化为电信号或光信号；数据处理系统则对检测系统输出的信号进行采集、处理和分析，得到样品的定性和定量结果。

当实验数据出现异常时，你会如何排查问题？

答案：当实验数据出现异常时，首先检查实验操作是否严格按照标准流程进行，包括试剂的配制、仪器的使用、样品的处理等环节，看是否存在操作失误。接着检查实验所使用的试剂和耗材是否在有效期内，质量是否合格。然后对实验仪器进行检查和校准，确认仪器是否正常运行。如果以上都没问题，考虑是否是实验设计存在缺陷，或者实验环境因素（如温度、湿度等）影响了实验结果，必要时可重复实验进行验证。

如何进行微生物菌落计数？

答案：进行微生物菌落计数时，常用稀释涂布平板法。首先将待检样品进行一系列梯度稀释，使样品中的微生物浓度降低到合适范围。然后分别吸取一定体积的各稀释度样品溶液，均匀涂布在固体培养基表面。将涂布后的平板倒置在适宜温度下培养一定时间，待菌落生长完全后，使用菌落计数器或直接肉眼观察，统计平板上的菌落数量。为保证结果的准确性，通常选择菌落数在30-300之间的平板进行计数，并取多个平行平板的平均值作为最终结果。

说明酶联免疫吸附测定（ELISA）的基本步骤和注意事项？

答案：酶联免疫吸附测定（ELISA）的基本步骤包括：包被，将抗原或抗体固定在固相载体表面；封闭，用无关蛋白质封闭载体上未结合的位点，减少非特异性吸附；加样，加入待检样品和酶标记物；孵育，使抗原抗体充分反应；洗涤，去除未结合的物质；显色，加入底物使酶催化显色；测定，用酶标仪测定吸光度值。注意事项有：试剂使用前需恢复至室温；加样要准确，避免交叉污染；洗涤要充分，以去除残留杂质；严格控制孵育时间和温度；显色时间要适当，避免颜色过深或过浅影响结果判断。

如何进行实验试剂的配制和保存？

答案：实验试剂的配制首先要根据实验要求准确计算所需试剂的用量，使用合适的称量仪器进行称量。对于固体试剂，通常先在烧杯中溶解，再转移至容量瓶中定容；对于液体试剂，按照比例准确量取后混合均匀。配制好的试剂要贴上标签，注明试剂名称、浓度、配制日期、配制人等信息。试剂的保存要根据其性质选择合适的条件，如易挥发、易燃的试剂应存放在阴凉通风处；见光易分解的试剂要用棕色瓶保存，并放置在暗处；需要低温保存的试剂要放入冰箱冷藏或冷冻。同时，定期检查试剂的有效期和质量，及时清理过期或变质的试剂。

请描述基因克隆的主要流程？

答案：基因克隆的主要流程包括：首先获取目的基因，可以通过PCR扩增、从基因文库中筛选等方法；然后选择合适的载体，如质粒载体，对载体进行酶切处理，使其产生与目的基因互补的粘性末端或平末端；接着将目的基因与载体进行连接，形成重组DNA分子；之后将重组DNA分子导入受体细胞，常用的方法有转化、电穿孔等；最后对导入重组DNA的受体细胞进行筛选和鉴定，如通过抗生素抗性筛选、PCR鉴定等方法，筛选出含有目的基因的阳性克隆，并对其进行培养和扩