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团体标准
T/CIQA124—2025
饮料和包装饮用水中霉菌和酵母快速计数荧光染色方法
Rapiddetectionofmoldsandyeastsinbeveragesanddrinkingwater——Fluorescentstainingmethod
2025-07-14发布2025-07-14实施
中国出入境检验检疫协会发布
T/CIQA124—2025
饮料和包装饮用水中霉菌和酵母快速计数
——荧光染色方法
1范围
本文件描述了饮料和包装饮用水中霉菌和酵母荧光染色快速计数方法。
本文件适用于饮料、包装饮用水以及经稀释可过滤的饮料浓缩汁（葡萄浓缩汁、苹果浓缩汁等）、固体饮料中霉菌和酵母的快速测定。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件:不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB4789.1食品安全国家标准食品微生物学检验总则
GB4789.15食品安全国家标准食品微生物学检验霉菌和酵母计数
GB4789.25食品安全国家标准食品微生物学检验酒类、饮料、冷冻饮品采样和检样处理
GB4789.45食品安全国家标准微生物检验方法验证通则
GB19489实验室生物安全通用要求
3术语和定义
GB4789.15和GB4789.25中界定的术语和定义适用于本文件
4方法原理
本方法基于荧光染色技术和膜过滤技术，对滤膜上收集的具生物活性的霉菌和酵母进行荧光染色并计数。霉菌和酵母代谢过程产生的酶可分解荧光染色剂，释放荧光素，荧光素在活细胞内积累并发出荧光，该荧光被EZ-Fluo?/Milliflex?Quantum1)微生物快速检测系统捕获并放大，从而实现对霉菌和酵母的快速计数。
T/CIQA124—2025
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5设备和材料
5.1恒温培养箱：28℃±1℃,32.5℃±2.5℃。
5.2无菌移液管或移液器及相应吸头：1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)。
5.3无菌锥形瓶：容量500mL。
5.4EZ-Fluo?/Milliflex?Quantum微生物快速检测系统。
5.5EZ-Fit1）过滤系统或者Oasis1）一体化过滤系统（含泵，泵真空压力小于75KPa）。
5.6Petri-PadTM1）无菌平皿。
5.7S-Pak?1）或者EZ-Pak?1）无菌滤膜:孔径0.45μm，直径47mm，材质MCE（混合纤维素）。
5.8EZ-Fit?1）一次性滤杯（含滤膜），Microfil1）滤杯（不含滤膜）。
5.9无菌平头镊子。
5.10电子天平：感量0.1g。
6培养基和试剂
6.1马铃薯葡萄糖琼脂：见A.1，也可以使用商品化的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。
6.2磷酸盐缓冲液：见A.2。
6.3生理盐水：见A.3。
6.4蒸馏水。
6.5EZ-Fluo?/Milliflex?Quantum荧光染色试剂。
1)EZ-Fluo?/Milliflex?Quantum、EZ-Fit、Oasis、Petri-PadTM、S-Pak、EZ-Pak?、EZ-Fit?、Microfil是由默克化工技术（上海）有限公司提供的产品的商品名。给出这一信息是为了方便本文件使用者。如果其他产品具有相同的效果,那么可使用这些等效的产品。
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T/CIQA124—2025
7检测程序
检样
检样
稀释，如果是浓稠样品需要使用稀释液进行10倍稀释
样品过滤
接种培养，滤膜平铺到马铃薯葡萄糖琼脂上培养
28℃±1℃24h~48h
荧光染色，将转移到Petri-PadTM中，均匀放置到垫片上继续培养
32.5℃±2.5℃30min
计数
继续培养
(选做)
图1霉菌和酵母荧光染色法检验程序
8.操作步骤
8.1样品前处理
8.1.1包装饮用水、不含固形物的饮料可直接滤膜过滤。建议取样量不少于10mL。
8.1.2饮料浓缩汁和固体饮料样品，取25mL(g)样品置于225mL无菌磷酸盐缓冲液或无菌生理盐水或无菌蒸馏水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min,制成1:10的样品匀液。根据样品污染程度的估
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