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PolymeraseChainReaction(PCR)Amplification聚合酶链式反应扩增

Aftertheexperimentdone,studentsshouldbeabletoexplaintheprincipleofPolymeraseChainReaction(PCR)andknowhowtorunaPCRexperiment.实验目的(ExperimentalPurpose)通过本实验学习PCR反应的基本原理与实验技术。

二、实验原理(ExperimentalPrinciple)PCRwasinventedbyKaryMullisandhiscolleaguesinthe1980s,itisarelativelysimpletechniquebywhichaDNAorcDNAtemplateisamplifiedmanythousandormillionfoldsquicklyandreliably.PCR技术是KaryMullis和他的同事于20世纪80年代发明的。该技术相对较为简单，它可以快速可靠地将DNA或cDNA模板扩增数千倍甚至上百万倍。

Polymerasechainreaction(PCR)isusedtoamplifyasequenceofDNA,usingapairofoligonucleotideprimerseachcomplementarytooneendoftheDNAtargetsequence.TheseareextendedtowardseachotherbyathermostableDNApolymeraseinareactioncycleofthreesteps:denaturationoftemplate,annealingofprimersandextensionoftheprimers.聚合酶链式反应(PCR)用于利用一对寡核苷酸引物扩增一段DNA序列，其中每条引物分别与靶序列的两端互补。这对引物通过三步循环反应在热稳定的TaqDNA聚合酶的作用下各朝着对应的方向延伸，每步循环反应包括以下三个步骤：模板变性，引物退火和引物延伸。

Asfigureexplains,thistechniqueusesenzymeDNApolymerasetomakeacopyofadefinedregionofDNA.如图所示，它可以利用DNA聚合酶对一定区域内的DNA进行扩增。

Firstahightemperature(about95℃)toseparatetheDNAstrands;（首先，高温(约95℃)使DNA双链解离）Secondarelativelylowtemperature(about55℃)toallowtheprimerstoannealtothetemplateDNAstrands;（其次，在相对较低的温度(约55℃)下使引物与模板DNA链退火）Thirdamediumtemper-ature(about72℃)toallowDNAsynthesis.（然后，在适中的温度(约72℃)下使DNA合成。）Eachcycletakesaslittleasafewminutes,anditusuallyrakesfewerthan30cyclestoproduceasmuchamplifiedDNAasweneed.

AtypicalamplificationreactionincludesPrimers(引物)TemplateDNA(模板DNA)TaqDNAPolymerase(TaqDNA聚合酶)Nucleotides（寡核苷酸,dNTP）PCRbuffer(PCR缓冲液)

三、试剂与器材（Reagentsandapparatus）Ⅰ.InstrumentsPCRAmplifier（PCR仪）01ElectrophoresisSystem（电泳系统