2026届高考生物总复习（第1轮）教师用书：专题10 微专题9　PCR和基因编辑技术.docxVIP

微专题九PCR和基因编辑技术

一、PCR技术

(2024·山东期末)拟南芥中RGL1酶作为E3泛素连接酶(AtRZF1)的抑制因子在响应植物干旱胁迫中发挥着重要作用。研究发现，AtRZF1功能丧失突变体比野生型拟南芥具有更高的耐旱性。研究人员采用融合PCR技术(原理如图所示)将RGL1酶基因和AtRZF1基因连接起来构建融合基因以研究两种基因的相互作用。下列说法正确的是()

A.RGL1酶在植物干旱胁迫响应中起到正调控作用

B.图中第一阶段经过1次PCR循环即可获得双链等长的DNA

C.图中第二阶段构建融合基因时能够起到“搭桥融合”作用的引物有4种

D.融合PCR技术操作过程中的每个阶段都需经历两次降温和一次升温

【审题关键】信息①：融合PCR技术是一个新名词，要认真识图，明白原理；

信息②：由于DNA聚合酶都是从5′端到3′端复制子链，因此引物应结合到模板的3′端；

信息③：由第一阶段知，人为增加了引物2和引物3的5′端的一段序列；

信息④：由第二阶段知，人为增加的引物2和引物3的一段序列是可以碱基互补配对的。

【解析】据题意，E3泛素连接酶(AtRZF1)功能丧失突变体比野生型拟南芥具有更高的耐旱性，说明AtRZF1在干旱胁迫响应中起抑制作用，而RGL1酶作为AtRZF1的抑制因子，所以RGL1酶在植物干旱胁迫响应中起到正调控作用，A正确；由图可知，引物2和引物3的一端都添加了一段序列，所以经过1次PCR循环得到的是含有引物2、引物3的产物，其DNA双链不等长，该产物继续进行第二次扩增(循环)，才能获得双链等长的DNA，B错误；由图可知，融合PCR中是通过在引物2和引物3的一端添加能碱基互补配对的序列，从而在第二阶段利用这两段互补序列形成具有重叠链的PCR引物，所以能够起到“搭桥融合”作用的引物有2种，即引物2和引物3，C错误；PCR技术操作过程中，每轮循环是需要一次降温和两次升温，D错误。

【答案】A

1.PCR的原理

(1)DNA半保留复制。

(2)DNA的热变性原理，通过调节温度来控制DNA双链的解聚与结合。

2.PCR的条件

(1)模板：DNA母链。

(2)原料：4种脱氧核苷酸。

(3)酶：耐高温的DNA聚合酶。

(4)能量。

(5)2种引物。

(6)含Mg2+的缓冲溶液。

3.PCR的过程

4.PCR产物测定方法：琼脂糖凝胶电泳。

5.PCR的应用

(1)目的基因的扩增。

(2)基因检测。

(3)测定DNA序列，进行亲子鉴定、遗传病的诊断、传染病毒的诊断。

6.常规PCR基础上改进的PCR分类

(1)逆转录PCR(RT－PCR)：提取总RNA，以mRNA为模板，利用寡脱氧胸腺苷酸或随机引物在逆转录酶的作用下合成cDNA，再以cDNA为模板进行常规的PCR扩增。

(2)实时PCR(real－timePCR)，是一种定量测定样品中特定DNA片段的聚合酶链式反应。反应中一般使用带有荧光标记的PCR引物，从而能够通过荧光监测每次PCR循环后扩增所得的产物的量。

(3)重叠延伸PCR技术是一项重要的基因定点突变技术，其主要设计思路是用具有互补配对片段的引物(图中的引物2和3，突起处代表与模板链不能互补的突变位点)，分别进行PCR，获得有重叠链的两种DNA片段，再在随后的扩增反应中通过重叠链的延伸获得想要的目的基因。

(4)融合PCR技术采用具有互补末端引物，形成具有重叠链的PCR产物，再通过PCR产物重叠链的延伸，从而将不同来源的任意DNA片段连接起来。与重叠延伸PCR技术也有相似之处。

1.(2024·山东期中)荧光定量PCR技术可定量检测样本中某种DNA含量。其原理是：在PCR体系中每加入一对引物的同时加入一个与某模板链互补的荧光探针，荧光探针两端分别标记一个荧光发射基团和一个荧光猝灭基团，探针完整时，发射基团发射的荧光信号被猝灭基团吸收，荧光监测系统接收不到荧光信号。当耐高温的DNA聚合酶催化子链延伸至探针处，会水解探针，使荧光监测系统接收到荧光信号。即每扩增一次，就有一个荧光分子生成(如图所示)。下列相关叙述正确的是()

A.扩增过程中引物先于探针结合到模板DNA上

B.在PCR系统中需加入解旋酶

C.荧光信号积累越多，说明PCR循环次数越多

D.若扩增n次，则其需要消耗2n-1个探针

【解析】C基因扩增过程中需要特定的引物，该引物的作用是定位基因，与模板链结合并为子链的延伸提供起点，扩增过程中引物和探针应同时结合到模板DNA上，A错误；在PCR反应系统中无需加入解旋酶，可通过高温解旋DNA，B错误；据题干信息“即每扩增一次，就有一个荧光分子生成”可知，荧光信号积累越多，说明PCR循环次数越多，C正确；据题干信息“在PCR反应体系中每加入一对引物的同时加入一个与某模板链互补的荧光探针”，即每个DNA分