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构建超大规模天然噬菌体纳米抗体库
目录
一、文档综述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4
1.1研究背景与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4
1.1.1噬菌体展示技术概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5
1.1.2纳米抗体应用前景．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6
1.1.3超大规模噬菌体纳米抗体库的潜在价值．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7
1.2国内外研究现状．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．9
1.2.1噬菌体展示文库构建技术．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．10
1.2.2纳米抗体开发进展．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．12
1.2.3超大规模噬菌体抗体库相关研究．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．13
1.3研究目标与内容．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14
1.3.1主要研究目标．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．15
1.3.2具体研究内容．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．17
1.4技术路线与创新点．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．18
1.4.1技术路线图．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．19
1.4.2本研究的创新之处．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．21
二、超大规模噬菌体纳米抗体库构建方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．21
2.1噬菌体展示系统选择．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．22
2.1.1噬菌体菌株特性分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．26
2.1.2展示蛋白选择与改造．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27
2.2纳米抗体分子设计与制备．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．28
2.2.1纳米抗体结构域选择．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．29
2.2.2纳米抗体基因构建．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．31
2.2.3纳米抗体表达与纯化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32
2.3超大规模噬菌体文库构建策略．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．38
2.3.1文库容量设计．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．39
2.3.2基因组装技术．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．41
2.3.3噬菌体文库扩增与验证．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．41
2.4表达盒构建与噬菌体展示．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．42
2.4.1表达盒设计原则．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．43
2.4.2噬菌体展示载体构建．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．46
2.4.3噬菌体展示库转化与扩增．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．48
三、超大规模噬菌体纳米抗体库的筛选与鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．49
3.1筛选靶标选择与制备．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．50
3.1.1靶标蛋白选择依据．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．51
3.1.2靶标蛋白表达与纯化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．52
3.2筛选方法建立．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．56
3.2.1筛选模式选择．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．57
3.2.2筛选条件优化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．59
3.3筛选过程
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