认识高效液相色谱仪10课件.pptxVIP

农药分析认识高效液相色谱仪

高效液相色谱仪结构：高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统。辅助装置：梯度淋洗、自动进样及数据处理等。

一、高压输液系统储液罐高压输液泵过滤器梯度洗脱装置高压输液泵满足要求：密闭性好、输出流量恒定、压力平稳、范围宽、便于迅速更换溶剂及耐腐蚀。恒流泵：又称机械泵。特点：在一定操作条件下，输出流量保持恒定，与色谱柱引起阻力变化无关。分类：分为机械注射泵和机械往复泵。

往复柱塞泵：泵体由小的溶剂室、宝石活塞杆、进出液的两个单向阀组成。通常由步进电机带动凸轮或偏心轮转动，驱动活塞杆往复运动。改变活塞冲程或往复频率，即改变电机转速以调节泵的流量。高压输液泵

梯度洗脱装置定义：梯度洗脱，又称溶剂程序，指一个样品在分离过程中，溶剂组分或溶剂强度随洗脱时间按一定规律连续变化的洗脱方式。分类：外梯度（高压梯度）:利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。内梯度（低压梯度）:一台高压泵，通过比例调节阀，将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。

梯度洗脱特点：改善分离，加快分析速度；改善峰形，减少拖尾，可能引起基线漂移。分配比变化范围宽的复杂样品应采用梯度洗脱分离方式。

梯度洗脱作用程序升温为使样品的组分在最佳容量因子值范围流出柱子，使保留时间过短而拥挤不堪、峰形重叠的组分或保留时间过长，峰形扁平宽大的组分都能获得良好的分离。目的气相色谱：通过改变柱温来达到改变组分容量因子。HPLC：通过改变流动相的组成来达到相应目的。

进样系统进样系统：将被分离的样品导入色谱柱的装置，一般包括进样口、注射器和进样阀等。要求密封性、重复性好，死体积小，便于实现自动化。

分离系统—色谱柱色谱柱是HPLC核心部件，包括柱管和固定相两部分。按内径大小分类：分析柱：柱长10～25cm,内径2～5mm；制备或半制备柱：柱长10～30cm,内径20～40mm；小内径柱或微径柱；毛细管柱。

分离系统—色谱柱保护柱：一般在分析柱前装上较短的保护柱，不仅可除去溶剂中的颗粒杂质和污染物，而且可除去样品中含有与固定相不可逆结合的组分，已保护较昂贵的分析柱，延长使用寿命。装住方法：一般采用匀浆填充法装柱，先将固定相填料调成匀浆后在高压泵作用下，快速将其压入装有洗脱液的色谱柱内，经冲洗后，即可备用。

检测器定义：反映色谱过程中组分浓度随时间变化的重要部件。要求：灵敏度高、重复性好、线性范围宽、死体积小以及对温度和流量的变化不敏感等。检测系统HPLC常用的检测器：紫外——可见光检测器光电二级管阵列检测器荧光检测器折光检测器电化学检测器蒸发光散射检测器质谱检测器

液相色谱仪：由高压输液系统、进样系统、分离系统和检测系统组成。常用检测器：紫外检测器、二极管阵列检测器、示差折光检测器和荧光检测器。分离系统：指担负分离作用的色谱柱，它是色谱仪的心脏，对色谱柱的要求是柱效高、选择性好、分析速度快等。小结输液系统：包括储液器、高压泵、梯度洗脱装置等。进样系统：将待测样品引入色谱柱的装置。