血红蛋白的提取与分离.pptVIP

第1页，共39页，星期日，2025年，2月5日体验从复杂体系中提取生物大分子的基本过程和方法，并了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理。1.主要概念：①凝胶色谱法②电泳法③缓冲溶液它们在血红蛋白的提取中分别起到什么作用。2.主要原理：①凝胶色谱法分离蛋白质的原理②电泳法分离样品的原理③缓冲溶液的组成和作用机理3.课题重点：凝胶色谱法的原理和方法学习目标第2页，共39页，星期日，2025年，2月5日(一）蛋白质占细胞干重的50％以上，细胞中含量最多的有机物。2.组成元素C、H、O、N1.含量3.相对分子质量高分子化合物氨基酸的种类不同；数目成百上千；排列顺序变化多端；多肽链的空间结构千差万别。4.蛋白质结构的多样性第3页，共39页，星期日，2025年，2月5日(二）蛋白质的提取1.分离生物大分子的基本思路：选用一定的物理或化学的方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。2.蛋白质分离和提取的原理：根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力等等，可以用来分离不同种类的蛋白质。第4页，共39页，星期日，2025年，2月5日人们用鸡的红细胞提取DNA，用哺乳动物的红细胞提取血红蛋白的原因是什么？鸡的红细胞具有细胞核，含有DNA，便于进行DNA的提取，哺乳动物的红细胞无细胞核，结构简单，血红蛋白含量丰富便于提取血红蛋白。第5页，共39页，星期日，2025年，2月5日大多数凝胶是由多糖类化合物（如葡聚糖或琼脂糖）构成的多孔小球体，内部有许多贯穿的通道。（三）凝胶色谱法（分配色谱法）2.凝胶：根据被分离物质的蛋白质相对分子质量的大小，利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，来进行分离。1.概念：3.凝胶色谱法的原理—分子筛效应：①当相对分子量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢;而相对分子量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快。相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。②依据的特性是：蛋白质分子量的大小。第6页，共39页，星期日，2025年，2月5日4.凝胶色谱法分离蛋白质的原理和具体过程第7页，共39页，星期日，2025年，2月5日第8页，共39页，星期日，2025年，2月5日在一定的范围内，凡是能够抵制外加少量强酸或强碱的影响使原来溶液PH值基本保持不变的混合溶液。能够抵制外界的酸和碱对溶液PH值的影响，维持PH基本不变。通常由1－2种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同PH范围内使用的缓冲液。利用缓冲液模拟细胞内的PH环境，保证血红蛋白的正常结构和功能，便于观察(红色)和科学研究(活性)。（四）缓冲溶液1.概念:2.作用:3.缓冲溶液的配制:4.在本课题中使用的缓冲液是:__________,其目的是:磷酸缓冲液第9页，共39页，星期日，2025年，2月5日（五）电泳1.概念带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。2.原理②在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。①许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的PH下，这些基团会带上正电或负电。第10页，共39页，星期日，2025年，2月5日③电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小，形状的不同使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。第11页，共39页，星期日，2025年，2月5日3.类型琼脂糖凝胶电泳和聚丙稀酰胺凝胶电泳。4.实例由单体丙烯酰胺和交联剂N,N-甲叉双丙烯酰胺在引发剂和催化剂的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶。十二烷基磺酸钠（SDS）—聚丙稀酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量。①应用②聚丙稀酰胺凝胶第12页，共39页，星期日，2025年，2月5日蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带静电荷的多少以及分子的大小等因素。③原理④SDS作用为了消除静电荷对迁移率的影响可以在凝胶中加入SDS。第13页，共39页，星期日，2025年，2月5日样品处理——粗分离——纯化——纯度鉴定（一）蛋白质提取和分离步骤第14页，共39页，星期日，2025年，2月5日血液血浆水分固体物质血浆蛋白无机盐磷脂葡萄糖等血细胞白细胞血小板红细胞