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猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体捕获ELISA检测方法：构建、验证与实践应用

一、引言

1.1研究背景与意义

猪繁殖与呼吸综合征（PorcineReproductiveandRespiratorySyndrome，PRRS），俗称猪蓝耳病，是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PorcineReproductiveandRespiratorySyndromeVirus，PRRSV）引起的一种对全球养猪业危害巨大的传染病。自20世纪80年代末在美国首次暴发以来，迅速在世界各地蔓延，给养猪业造成了难以估量的经济损失。1996年，郭宝清等在我国首次分离出PRRSV，证实了该病毒在我国的存在及流行。此后，PRRS在我国养猪业中频繁发生，特别是2006年暴发的高致病性猪繁殖与呼吸综合征，更是给我国养猪业带来了沉重打击。

PRRSV主要侵害猪的免疫系统，导致猪体免疫功能下降，极易继发感染其他细菌性和病毒性疾病。感染猪群常表现出母猪繁殖障碍、仔猪断奶前高死亡率、育成猪呼吸道疾病等症状。母猪感染后，会出现发热、厌食、呼吸困难等症状，妊娠后期常发生早产、产弱仔、流产、死胎等情况；仔猪感染后，会出现腹泻、腹式呼吸、腹股沟陈旧出血点等症状，严重时可导致死亡；育成猪感染后，会出现结膜炎、食欲不振、生长缓慢等症状。这些症状不仅会增加猪只的死亡率和淘汰率，降低养殖效益，还会影响猪肉的品质和安全，对消费者健康构成潜在威胁。

随着我国养猪业规模化、集约化程度的不断提高，猪群的流动更加频繁，这为PRRSV的传播提供了有利条件。此外，PRRSV具有高度的变异性，不断出现新的变异毒株，使得疫情防控难度进一步加大。因此，及时、准确地检测猪群中PRRSV的感染情况，对于制定科学合理的防控措施、降低疫情损失具有至关重要的意义。

目前，针对PRRSV的检测方法主要包括病毒分离鉴定、核酸检测和血清学检测等。病毒分离鉴定是诊断PRRSV感染的金标准，但该方法操作复杂、耗时较长，对实验条件和技术要求较高，难以在基层推广应用；核酸检测方法如PCR、荧光定量PCR等，具有灵敏度高、特异性强等优点，但只能检测病毒的核酸，无法区分病毒感染的阶段和机体的免疫状态；血清学检测方法则通过检测猪血清中的抗体来判断猪群的感染情况，具有操作简便、快速、成本低等优点，能够反映猪群的整体免疫水平和感染状态，在PRRS的防控中发挥着重要作用。

酶联免疫吸附试验（Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay，ELISA）是血清学检测中应用最为广泛的方法之一。其中，抗体捕获ELISA检测方法具有较高的特异性和灵敏度，能够有效地检测出猪血清中的PRRSV抗体，在PRRS的诊断、监测和流行病学调查中具有重要的应用价值。然而，目前市场上的PRRSV抗体捕获ELISA检测试剂盒存在质量参差不齐、价格较高等问题，限制了其在基层的推广应用。因此，建立一种快速、准确、灵敏、经济的猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体捕获ELISA检测方法，对于我国养猪业的健康发展具有重要的现实意义。

1.2国内外研究现状

猪繁殖与呼吸综合征病毒的检测技术一直是国内外学者研究的重点，旨在实现快速、准确、灵敏的检测，为疫病防控提供有力支持。经过多年发展，已取得了丰硕成果，多种检测方法不断涌现并持续改进。

在国外，自20世纪80年代末PRRSV被发现以来，美国、荷兰等国家率先开展了相关检测技术研究。早期主要依赖病毒分离培养，但因其操作繁琐、耗时久，难以满足快速诊断需求。随后，以PCR技术为代表的核酸检测方法逐渐兴起，美国学者开发的普通PCR检测方法，能够快速检测出病毒核酸，大大提高了检测效率。随着技术的进步，荧光定量PCR技术凭借其灵敏度高、定量准确等优势，成为病毒核酸检测的主流方法，被广泛应用于病毒感染诊断以及排毒期监测。然而，由于PRRSV基因易突变，引物结合部位序列的改变可能导致扩增失败，为减少漏检，国外学者不断收集新毒株，设计针对多个高度保守区域的引物，开发出多重实时荧光PCR反应体系。与此同时，基于CRISPR-Cas系统的新型核酸检测技术也取得了显著进展，如Y.FChang等开发的CRISPR-Cas13a检测技术，对PRRSV具有高特异性和灵敏度，检出极限达172copies/μL，不仅可用于实验室荧光检测，还能与免疫层析结合进行可视化现场检测，为资源贫乏地区提供了新的检测手段。

在血清学检测方面，ELISA技术是应用最为广泛的方法之一。国外众多科研团队致力于开发高特异性和灵敏度的ELISA检测试剂盒，如IDEXX公司的PRRSV抗体检测试剂盒，已在