任务三保护剂protector又称稳定剂stabilize.pptVIP

任务三 保护剂(protector)又称稳定剂（stabilizer），指一类能防止生物活性物质在冷冻真空干燥时受到破坏的物质。分类：（根据其作用机理）——渗透剂：如二甲基亚砜（DMSO）、甘油和蔗糖等——非渗透剂：如聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和蛋白质等（根据其分子量大小）——高分子物质、低分子物质。（按其化学性质）——复合物、糖类、盐类、醇类、酸类和聚合物广义上讲：保护剂是保护微生物和寄生虫等活力和免疫原及酶和激素等生物活性的一类物质，还包括细菌或病毒的营养液、赋形剂和抗氧化剂。?

复合物脱脂乳、明胶、蛋白质、蛋白胨、糊精、血清、甲基纤维素等糖类蔗糖、乳糖、麦芽糖、葡萄糖、果糖等盐类乳酸钙、谷氨酸钠、氯化钠、氯化钾、醋酸铵、硫代硫酸钠等醇类山梨醇、甘油、甘露醇、肌醇、木糖醇等酸类柠檬酸、酒石酸、氨基酸等聚合物葡聚糖、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)等分类保护剂一些常用的冷冻干燥保护剂一、冻干保护剂组成1.营养液：可修复因冻干而受损的细胞，使冻干制品含有一定量水分；可促进高分子物质形成骨架，使冻干制品呈多孔的海绵状，增加溶解度。常为低分子有机物，如脱脂乳、蛋白胨、糖类。2.赋形剂：起骨架作用防止低分子物质的碳化和氧化，保护活性物质不受加热影响使冻干制品形成多孔性、疏松的海绵状物，增加溶解度常为高分子有机物，如蔗糖、山梨醇、乳糖、PVP类3.抗氧化剂：抑制冻干制品中的酶作用，增加生物活性物质在冻干后贮存期间的稳定性，如维生素C、维生素E和硫代硫酸钠等。①防止活性物质失去结构水及阻止结构水形成结晶而导致生物活性物质的损伤；②降低细胞内外的渗透压差、防止细胞内结构水结晶，以保持细胞的活力；③保护或提供细胞复苏所需的营养物质，有利于生活力的复苏和迅速修复自身。二、冻干保护剂作用机制三、影响保护剂效能的因素每种微生物或生物制品均有其最佳冻干保护剂的组合，多种因素对保护剂的效能有十分明显的影响:1.保护剂种类2.保护剂组分浓度3.保护剂配制方法4.保护剂酸碱度因此，应做最佳保护剂的选择试验：（1）保护剂冻干前后的活菌数，病毒滴度或效价测定的比较试验（2）不同保护条件和不同保存期的比较试验四、常用的冻干保护剂各种微生物适用的保护剂甚多，各国的配制方法也各异。即使同一种制品所使用的保护剂组分也不一样。如：鸡新城疫弱毒疫苗，5%蔗糖脱脂乳；日本用5%乳糖，0.15%聚乙烯吡咯烷酮,1%马血清或0.4%蔗糖脱脂乳,0.2%聚乙烯吡咯烷酮猪丹毒弱毒菌苗,我国用5%蔗糖,1.5%明胶冻干剂;日本用5%脱脂乳,2.5%酵母浸膏(一)不同微生物适用的保护剂由于细菌、病毒、支原体、立克次氏体、酵母菌等生物学特性不同,其适用的冻干保护剂也不相同.各类微生物常用的保护剂如下:1.需氧和兼性厌氧性细菌10%蔗糖,5%蔗糖脱脂乳,5%蔗糖,1.5%明胶,10-20%脱脂乳和含1%谷氨酸钠的10%脱脂乳等2.厌氧性细菌含0.1%谷氨酸钠的10%乳糖、10%脱脂乳、7.5%葡萄糖血清等3.病毒常以下列物质的不同浓度或不同比例混合组成冻干保护剂:明胶、血清、谷氨酸钠、羊水、蛋白胨、蔗糖、乳糖、山梨醇、葡萄糖和PVP等4.支原体50%马血清、1%牛血清白蛋白、5%脱脂乳和7.5%葡萄糖加马血清等。5.立克次氏体10%脱脂乳6.酵母菌马血清、含7.5%葡萄糖的马血清及1%谷氨酸钠的10%脱脂乳等。(二)几种兽医生物制品常用的保护剂配制1.5%蔗糖(乳糖)脱脂乳保护剂蔗糖(乳糖)5g,加脱脂乳至100ml,充分溶解后,100℃蒸汽间歇灭菌3次,每次30分钟;或110-116℃高压灭菌30-40分钟.用途:羊痘、鸡新城疫、鸡痘和鸭瘟等病毒性活疫苗的保护剂2.明胶蔗糖保护剂明胶2-3%(g/ml),蔗糖5%(g/ml),硫脲1%-2%(g/ml)先将12%-18%明胶液,30%蔗糖液和6-12%硫脲液加热溶解,116℃高压灭菌30-40min;或100℃灭菌3次,每次30min.用途:猪肺疫和猪丹毒等细菌性活疫苗保护剂3.聚乙烯吡咯烷酮乳糖保护剂取聚乙烯吡咯烷酮K30-35g和乳糖10g,加蒸馏水至100ml,混合溶解,120℃高压灭菌20min4