维生素的测定.pptVIP

维生素B2的测定——液相色谱法方法原理：样品在稀盐酸溶液中经消化，使用淀粉酶和木瓜酶分解样液中的淀粉和蛋白质后，用C18柱，乙腈-磷酸盐缓冲溶液作流动相，以荧光检测器进行液相色谱法测定，求出样品中的维生素B2。教材P364第31页，共74页，星期日，2025年，2月5日三、维生素C的测定维生素C是一种已糖醛基酸，有抗坏血病的作用，所以被人们称做抗坏血酸。Vc广泛存在于植物组织中，新鲜的水果、蔬菜，特别是枣、辣椒、苦瓜、柿子叶、猕猴桃、柑橘等食品中含量较多。Vc具有较强的还原性，对光敏感，氧化后的产物称为脱氢抗坏血酸，仍然具有生理活性，进一步水解则生成2，3－二酮古乐糖酸，失去生理作用。食品分析中的所谓总抗坏血酸是指：抗坏血酸和脱氢抗坏血酸二者的总量。不包括二酮古乐糖酸和进一步的氧化产物。第32页，共74页，星期日，2025年，2月5日氧化氧化还原型抗坏血酸脱氢抗坏血酸2，3－二酮古乐糖酸三、维生素C的测定第33页，共74页，星期日，2025年，2月5日维生素C（还原型）纯品为白色无臭结晶，熔点190～192℃，溶于水或乙醇中，不溶于油剂。在水溶液中易被氧化，在碱性条件下易分解，在弱酸条件中较稳定，维生素C开始氧化为脱氢型抗坏血酸（有生理作用）。如果进一步水解则生成2，3-二酮古乐糖酸，失去生理作用。三、维生素C的测定第34页，共74页，星期日，2025年，2月5日荧光分光光度法(第一法)2，4-二硝基苯肼比色法?（总VC）(第二法)碘量法2，6-二氯靛酚法?（还原型VC）电位法高效液相色谱法HPLC三、维生素C的测定根据它具有的还原性质可以测定维生素C的含量。常用的测定方法有：第35页，共74页，星期日，2025年，2月5日(一)荧光法一、原理样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化生成脱氢型抗坏血酸后，与邻苯二胺反应生成具有荧光的喹喔啉。在一定条件下，喹喔啉的荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度成正比，以此测定食物中抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量。一定条件：激发光：338nm发射光：420nm三、维生素C的测定第36页，共74页，星期日，2025年，2月5日（二）2，4-二硝基苯肼法----Vc总量

GB/T5009.86—2003《蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸含量测定方法》第二法总抗坏血酸包括：还原型脱氢型二酮古乐糖酸型。此法是将样品的还原型抗坏血酸氧化为脱氢型抗坏血酸，然后与2，4-二硝基苯肼作用，生成红色的脎。脎的量与总抗坏血酸含量成正比，将红色脎溶于硫酸后进行比色，由标准曲线计算样品中总Vc。三、维生素C的测定第37页，共74页，星期日，2025年，2月5日1、原理：用酸处理过的活性碳把还原型的抗坏血酸氧化为脱氢型抗坏血酸，再与2，4－二硝基苯肼作用，生成红色的脎，其呈色强度与总抗坏血酸含量成正比，进行比色测定。在硫酸溶液中显色稳定，520nm波长处有最大吸收。三、维生素C的测定（二）2，4-二硝基苯肼法----Vc总量第38页，共74页，星期日，2025年，2月5日三、维生素C的测定（二）2，4-二硝基苯肼法----Vc总量2、测定步骤(1)样品提取同2，6-二氯靛酚滴定法(2)氧化处理：取25ml样品滤液+2g活性炭振摇1min→过滤→收集滤液+2%硫脲10ml(目的：防止Vc继续氧化)(3)显色反应:①取三支试管，每支试管都加入上述氧化稀释液4mL。其中一支试管作空白，另两只试管各加入1.0mL2％2，4－二硝基苯肼溶液，将三支试管放入（37±0.5）℃恒温箱或水浴中准确保温3h。取出试管放入冰水中。第39页，共74页，星期日，2025年，2月5日②空白管冷至室温后加入0.1mL2％2，4－二硝基苯肼溶液，10～15min后也放入冰水中。③向每支试管滴加5mL85％硫酸，边加边摇动，滴加时间至少需要1min。加完硫酸后将试管从冰水中取出，室温下准确放置30min后立即比色。三、维生素C的测定（二）2，4-二硝基苯肼法----Vc总量(4)比色：用1cm比色杯以空白液调零点，于500nm波长下测吸光值。第40页，共74页，星期日，2025年，2月5日(5)标准曲线的绘制取5个50ml容