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高频率LOH位点D4S2964中肝癌抑制基因鉴定及功能解析

一、引言

1.1研究背景与意义

肝癌，作为全球范围内严重威胁人类健康的重大疾病之一，其发病率和死亡率长期居高不下。据国际癌症研究机构（IARC）发布的全球癌症统计数据显示，在2020年，肝癌的新增病例数超过90万，死亡病例数约83万，分别位居全球恶性肿瘤发病和死亡的第六位和第三位。在中国，肝癌的形势更为严峻，由于乙肝病毒（HBV）的高感染率等因素，我国肝癌的发病率和死亡率均占全球的一半以上。肝癌起病隐匿，早期症状不明显，多数患者确诊时已处于中晚期，错过了最佳手术治疗时机，导致总体预后较差，5年生存率仅为12.1%左右。传统的治疗方法如手术切除、化疗、放疗等，对中晚期肝癌患者的疗效有限，且往往伴随着严重的副作用，给患者的生活质量带来极大影响。因此，深入研究肝癌的发病机制，寻找有效的诊断和治疗靶点，开发新的治疗策略，已成为当前医学领域亟待解决的重要课题。

在肿瘤的发生发展过程中，基因层面的改变起着关键作用。杂合性缺失（LossofHeterozygosity，LOH）作为一种常见的基因异常现象，指的是在体细胞中原本成对存在的等位基因，其中一个发生缺失或失活，导致该位点仅存在单一等位基因的状态。LOH的出现常常意味着肿瘤抑制基因的功能丧失，进而打破细胞增殖与凋亡的平衡，促进肿瘤细胞的生长、增殖和转移。大量研究表明，LOH在多种恶性肿瘤的发生发展过程中广泛存在，并且与肿瘤的恶性程度、转移潜能以及患者的预后密切相关。在乳腺癌中，17号染色体上的LOH位点与HER-2基因的扩增和过表达密切相关，这不仅影响肿瘤的侵袭性，还对乳腺癌的内分泌治疗和靶向治疗效果产生显著影响；在结直肠癌中，5号染色体长臂上的LOH事件常常导致APC基因的失活，进而激活Wnt信号通路，推动肿瘤的发生和发展。这些研究成果充分表明，深入探究LOH位点及其相关基因在肿瘤发生发展中的作用机制，对于揭示肿瘤的发病机制、寻找有效的诊断标志物和治疗靶点具有重要的理论和实践意义。

D4S2964作为一个高频率的LOH位点，在肝癌的发生发展过程中备受关注。已有研究初步揭示了该位点与肝癌之间的关联，但具体的分子机制尚未完全明确。在部分肝癌细胞系和组织样本中，发现D4S2964位点的LOH发生率显著高于正常肝组织，且这种LOH现象与肝癌的恶性程度、转移潜能以及患者的不良预后存在一定的相关性。然而，目前对于该位点内具体的肝癌抑制基因的鉴定和功能研究仍处于起步阶段，这在很大程度上限制了我们对肝癌发病机制的深入理解，也阻碍了基于该位点的肝癌诊断和治疗新策略的开发。

本研究旨在通过对高频率LOH位点D4S2964中肝癌抑制基因的鉴定，深入揭示肝癌发生发展的分子机制。这不仅有助于填补我们在肝癌基因研究领域的空白，为肝癌的早期诊断和精准治疗提供新的理论依据和潜在靶点，还可能为开发新型的肝癌治疗药物和治疗方法奠定基础，从而显著提高肝癌患者的生存率和生活质量，具有重要的科学意义和临床应用价值。

1.2国内外研究现状

在肝癌研究领域，LOH的研究一直是热点之一。国内外众多学者围绕LOH在肝癌发生发展中的作用机制、相关位点及基因等方面展开了广泛而深入的探索。

在国内，早期研究便发现肝癌组织中存在多个染色体区域的LOH现象。上海交通大学医学院附属瑞金医院的研究团队采用PCR及微卫星多态性技术，对65例肝癌1号染色体上28个微卫星标志位点杂合性缺失进行检测，结果显示1号染色体LOH率为91%，且在1p36.32-p36.33和1q12-q42区域内各微卫星标志LOH均在30%以上，提示这些区域可能存在与肝癌发生发展密切相关的基因。其中，1q12-q42区域的高频LOH为首次报道，为肝癌的研究提供了新的方向。同时，研究还发现1p36.33和1p32区域内的LOH与肝癌根治术后3年内转移和复发有关，有该区域LOH者术后转移、复发率明显高于无LOH者，这表明这些区域的基因改变可能在肝癌的转移复发过程中发挥着关键作用。

复旦大学肝癌研究所利用比较基因组杂交技术（CGH）在肝癌临床标本和对应转移灶中发现8p缺失与肝癌转移有关，并通过对高低转移模型LCI-D20和LCI-D35以及97-H细胞系的CGH分析进一步证实了这一发现。在此基础上，对22例临床标本杂合性缺失（LOH）的研究将缺失区域进一步缩小到8p23-3区和8p112区，为深入研究肝癌转移相关基因提供了更为精确的定位信息。

在国外，相关研究也取得了显著成果。一些研究通过对大量