生物化学酶引论.pptVIP

****酶作用专一性的假说诱导契合学说（1958年D.Koshland)inducedfit：该学说认为酶表面并没有一种与底物互补的固定形状，而只是由于底物的诱导才形成了互补形状,从而有利于底物的结合。（四个要点）第30页，共48页，星期日，2025年，2月5日诱导契合学说的要点酶有其原来的形状，不一定一开始就是底物的模板底物能诱导酶蛋白的形状发生一定变化（专一性结合）当酶的形状发生变化后，就使得其中的催化基团形成正确的排列。在酶反应过程中，酶活性中心构象的变化是可逆的。即酶与底物结合时，产生一种诱导构象，反应结束时，产物从酶表面脱落，酶又恢复其原来的构象。第31页，共48页，星期日，2025年，2月5日InducedFit第32页，共48页，星期日，2025年，2月5日InducedFit第33页，共48页，星期日，2025年，2月5日InducedFitcatalyzesphosphorylationofglucosetoglucose6-phosphateduringglycolysissuchalargechangeinaprotein’sconformationisnotunusualBUT:notallenzymesundergosuchlargechangesinconformationnotonlyenzymeschangetheirconformations;manystructural/’motor’proteinsundergolargeconformationalchangesduringtheir‘cycles’hexokinase第34页，共48页，星期日，2025年，2月5日9.5、酶的活力测定和分离纯化酶活力(Enzymeactivity)酶活力是指酶催化某一反应的能力，通常用反应产物的增加速率来表示。测定时通常测定反应初速率。(以底物浓度的变化在5%以内的速率为初速率)第35页，共48页，星期日，2025年，2月5日9.5、酶的活力测定和分离纯化酶的活力单位（U-activityunit）1961年，提出用“国际单位”（IU）表示酶活力，即：1个酶活力单位，是指在特定条件下，1分钟内能转化1微摩尔底物的酶量，或转化底物中1微摩尔有关基团的酶量。(25?C,最适底物浓度和最适pH）1IU=?mol/min1972年，提出新的酶活力国际单位：最适条件下，每秒钟能催化1mol底物转化为产物所需的酶量，定为1Kat=1mol/s所以：1Kat=60X106IU第36页，共48页，星期日，2025年，2月5日酶的比活力：酶的比活力用来表示酶的纯度，即每mg蛋白质所含的酶活力单位。比活力=活力U/mg蛋白质=总活力U/总蛋白mg有时也用单位酶制剂中含有的活力单位来表示，如U/g,U/mL。9.5、酶的活力测定和分离纯化第37页，共48页，星期日，2025年，2月5日酶活力测定方法（1）分光光度法（spectrophotometry）：多利用产物在紫外或可见光部分的光吸收性质，选择适当波长，测定反应过程的进行情况。简便、节约时间和样品，可以检测nmol/L水平的变化。（2）荧光法(fluorometry)：主要利用底物或产物的荧光性质。灵敏度高，但易受到干扰。（3）同位素测定法：同位素标记底物，反应后经分离，检测产物的脉冲数，即可换算成酶的活力单位。灵敏度最高。（4）电化学方法：pH计、氧电极法第38页，共48页，星期日，2025年，2月5日农药残留分析——分光光度法测乙酰胆碱酯酶活性第39页，共48页，星期日，2025年，2月5日9.6、核酶核酶有些RNA具有生物催化功能，统称为ribozyme。1982年，Cech等以原生动物嗜热四膜虫为材料，研究rRNA的基因转录问题时发现：rRNA前体在鸟苷和Mg2+存在下,切除自身的内含子，使两个外显子拼接起来，成为成熟的rRNA分子。进一步研究证明，这个内含子RNA分子具有特定的三维结构，可以再进行催化反应。第40页，共48页，星期日，2025年，2月5日9.6、核酶核酶作用的特点化学本质：RNA，DNA底物：RNA，肽键，葡聚糖，DNA反应特异性(专一性）：碱基催化效率：低第41页，共48页，星期日，2025年，2月5日9.6、核酶核酶的分类剪切型核酶剪接型核酶根据催化反应锤头核酶I内含子II内含子发夹核酶丁型肝炎病毒（HDV)核酶RNaseP第42页，共