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基因工程赋能小球藻：虾青素表达量提升的探索与实践

一、引言

1.1研究背景与意义

小球藻（Chlorella）作为一种单细胞绿藻，因其生长迅速、易于培养、光合效率高且能积累多种高价值活性物质，在食品、营养品和饲料等领域展现出广泛的应用价值，已被联合国粮农组织(FAO)列为21世纪人类的绿色营养源健康食品。在小球藻诸多可积累的活性物质中，虾青素以其独特的结构和强大的生物学功能备受瞩目。虾青素，化学名为3,3′-二羟基-4,4′-二酮基-β,β′-胡萝卜素，是一种酮式类胡萝卜素，呈红色固体粉末状，具脂溶性，不溶于水，可溶于有机溶剂。它广泛存在于生物界，特别是水生动物如虾、蟹、鱼和鸟类的羽毛中，起着显色的关键作用。

虾青素拥有多个共轭双键和酮基，这种独特的分子结构赋予其出色的光稳定性和热稳定性，同时也让虾青素分子呈现出强烈的共轭效应和卓越的抗氧化性能。研究表明，虾青素的抗氧化能力极强，能有效清除二氧化氮、硫化物、二硫化物等，可降低脂质过氧化作用，抑制自由基引起的脂质过氧化，其抗氧化活性数倍于玉米黄质、黄体素、角黄素、β-胡萝卜素和番茄红素，更是百倍于维生素E。除了强大的抗氧化性，虾青素还具有抑制肿瘤发生、增强免疫力、清除体内自由基等多方面的生理作用。在医药领域，它对紫外线引起的皮肤癌有良好的治疗效果，对糖尿病引起的眼病也有防治作用；在保健品行业，有助于强化免疫系统功能、保护视网膜免受紫外辐射和光氧化；在化妆品领域，凭借抗氧作用，可高效猝灭紫外线引起的自由基，防止皮肤光老化、减少UVA和UVB对皮肤的伤害、防止皮肤癌的产生、延缓细胞衰老、减少皮肤皱纹、减少黑色素沉积、减少雀斑产生，还能保持水分，让皮肤更有弹性、张力和润泽感。此外，在食品添加剂以及水产养殖等方面，虾青素同样具有广阔的应用前景，在食品中既有着色效果又可起到保鲜作用，在水产养殖中能使养殖生物呈现更鲜艳的色泽，提高其商品价值。

目前，虾青素的生产方法主要包括天然提取、化学合成以及微生物发酵法。化学合成虾青素虽能实现大规模生产，但其同天然虾青素在结构、功能、应用及安全性等方面差别显著。化学合成虾青素的稳定性、抗氧化活性和着色性明显低于天然虾青素，且在合成过程中可能产生杂质和副产物，对人体健康存在潜在风险，因此在实际应用中，市场更倾向于天然虾青素的提取。天然虾青素的提取来源主要有藻类、真菌和甲壳类动物。其中，从甲壳类动物中提取虾青素主要依靠从水产品加工废料中回收提取，但甲壳动物壳内的虾青素主要以酯的形式存在，提取过程需加入无机酸或有机酸破坏其与蛋白质或骨骼的部分结合，不仅回收率有限，产量和纯度也难以达到要求，且生产要求高、成本昂贵。在藻类来源中，雨生红球藻是目前最常使用的虾青素生产原料，其虾青素含量最高，最高积累量可达到细胞干重的4%，且雨生红球藻中以3S-3′S型虾青素为主，与鲑鱼等生物体内虾青素分子结构基本一致，不过其87%以酯化形式存在。而小球藻作为另一种可生产虾青素的藻类，具有容易培养、生长快速、耐高温和极端pH、易在户外培养等特点，其合成虾青素兼具红发夫酵母和雨生红球藻二者的部分优势特征，可以利用有机物如葡萄糖为碳源和能源在无光条件下快速合成虾青素，最适生长温度和最适虾青素合成温度24℃都接近室温，碳氮比越高越有利于虾青素的合成，虾青素以酯化态形式在细胞质中大量积累，比较容易达到较高的细胞浓度，同时生长繁殖与虾青素的积累可同步进行。这些特性有利于简化生产设备，节约生产时间，提高生产效率，为大规模培养提供了有利因素。然而，小球藻中虾青素含量远低于雨生红球藻中虾青素的含量，可能是其合成途径存在缺陷所致。

随着市场对虾青素需求的不断增长，尤其是对天然虾青素需求的日益旺盛，提高小球藻中虾青素的表达量成为亟待解决的关键问题。利用基因工程手段，对虾青素合成途中关键酶的基因表达进行调控，或引入外源基因优化小球藻的虾青素合成途径，有可能突破生理水平常规诱导增产虾青素的局限，实现小球藻虾青素产量的大幅提升。这不仅能够满足市场对天然虾青素不断增长的需求，降低对传统虾青素生产原料的依赖，还能推动小球藻产业的进一步发展，为相关领域提供更丰富、更优质且成本可控的虾青素来源，在保健品、医药、化妆品、食品添加剂以及水产养殖等行业产生深远的积极影响，具有重要的经济价值和社会意义。

1.2小球藻与虾青素概述

1.2.1小球藻的生物学特性

小球藻（Chlorella）隶属绿藻门（Chlorophyta）、绿藻纲（Chlorophyceae）、小球藻目（Chlorococcales）、小球藻科（Chlorellaceae）、小球藻属（Chlorella），是一类单细胞绿藻。其细胞微小，呈球形或椭圆形，直径通常在3-8微米，肉眼