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微难点4PCR相关问题分析
核心提炼
1.PCR的几个基础问题
(1)PCR中文名称是“聚合酶链式反应”,其最大的特点是体外大量扩增目的DNA,便于后续的基因表达载体构建或DNA电泳分析等。
(2)主要原理是DNA半保留复制(和DNA热变性),其特异性主要取决于引物设计和扩增条件控制(如退火温度、Mg2+浓度等)。
(3)基本程序:高温变性→低温复性(退火)→中温延伸。
(4)基本反应体系为:模板(一般为提取的总DNA或总RNA)、dNTP(原料和能量)、耐高温的DNA聚合酶、特异性引物、缓冲液(含Mg2+)等。
(5)PCR可以用如下反应式表示:
dNTP+模板+引物eq\o(
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