混合模式层析与扩张床吸附：重组人血白蛋白高效分离技术的深度探究.docxVIP

混合模式层析与扩张床吸附：重组人血白蛋白高效分离技术的深度探究

一、引言

1.1研究背景与意义

人血白蛋白（HumanSerumAlbumin，HSA）作为人体血浆中含量最为丰富的蛋白质，约占血浆蛋白总量的60%，在维持血浆渗透压、物质运输、营养补给等方面发挥着关键作用，在临床上，它被广泛应用于治疗失血性休克、创伤性休克、急性血容量减少和低白蛋白血症等危急重症，是不可或缺的“救命药”。同时，在生物制药领域，它还常被用作细胞培养的添加成分、药物辅剂、赋形剂等，具有极其广泛的应用价值。

当前，临床使用的人血白蛋白产品主要从人源血浆中提取纯化，常用的制备方法有冷乙醇沉淀、硫酸铵沉淀、利凡诺沉淀、辛酸盐沉淀等。然而，这些传统方法存在诸多弊端，一方面，血浆来源极为有限，且采集和供应受到严格监管，导致人血白蛋白的生产规模受限，难以满足日益增长的市场需求。根据相关统计数据，全球每年对人血白蛋白的需求量持续攀升，但血浆供应的增长速度远远滞后，使得市场供需矛盾日益突出。另一方面，从血浆中提取人血白蛋白无法完全排除病毒或其它潜在致病因子的影响，给使用者带来了潜在的健康风险，如乙肝病毒、丙肝病毒、艾滋病病毒等都有可能通过血浆制品传播，严重威胁患者的生命安全。

为了解决这些问题，利用现代生物技术构筑表达重组人血白蛋白（RecombinantHumanSerumAlbumin，rHSA）的酵母细胞成为了研究热点。这种方法能够避免病毒感染，有效解决血源供应紧张等问题，具有良好的应用前景。但是，酵母发酵液的成分极为复杂，除了含有目标产物重组人血白蛋白外，还包含蛋白酶、杂蛋白、核酸、脂肪酸、色素、多糖及热原物质等多种杂质。要获得高纯度的药用人血白蛋白，必须采用多步层析方法进行分离纯化，这无疑增加了生产成本和工艺复杂性。

在常规的rHSA分离过程中，常用阳离子交换层析来捕获rHSA，但这种方法需要对料液进行稀释和pH调节。稀释会导致目标物浓度下降，不仅使吸附容量降低，还会增大处理量，延长整个分离过程的时间；而调节pH至酸性环境又容易激活蛋白酶，导致人血白蛋白的降解，严重影响产品的质量和产量。因此，研发一种具有高选择性和耐盐特性的新型分离方法，对于改善rHSA分离工艺、提高生产效率和产品质量具有重要意义。

混合模式层析（Mixed-ModeChromatography，MMC）和扩张床吸附（ExpandedBedAdsorption，EBA）作为两种新型的生物分离方法，为解决上述问题提供了新的思路。混合模式层析的配基兼有多种功能基团，能够与目标蛋白产生多种相互作用，主要包括疏水和静电相互作用。这种独特的作用机制使得混合模式吸附剂具有较高的配基密度和较大的吸附容量，同时还具备耐盐吸附特性。它可以通过静电相吸来强化吸附过程，也能通过静电排斥来协助解吸，并且洗脱条件温和，特别适合大规模的分离纯化，目前已在抗体等蛋白的分离纯化中得到了成功应用。

扩张床吸附则利用独特设计的扩张床和吸附剂，在向上液流的作用下，床层适度膨胀，吸附剂颗粒形成稳定的分级分布。此时，细胞或细胞碎片等固体小颗粒可以直接穿过床层，而目标物则被吸附剂捕获。扩张床吸附突破了常规层析的局限性，能够直接处理含固体颗粒的复杂料液，实现从细胞培养液中直接捕获目标物，将固液分离、浓缩和初步纯化集成于一个单元操作中，大大减少了分离步骤，提高了分离效率。

本研究将混合模式层析和扩张床吸附相结合，旨在探索一种全新的、高效的分离重组人血白蛋白的方法。通过发挥混合模式层析的高效分离优势和扩张床吸附的高处理量优势，形成混合模式扩张床吸附新方法，实现从酵母发酵液中直接分离rHSA。这一研究不仅有望提高重组人血白蛋白的分离纯度和产量，满足临床上日益增长的需求，还将推动生物技术分离与纯化手段的创新发展，提升生产效率和生产质量，降低生产成本，为生物制药行业的发展提供有力的技术支持。

1.2国内外研究现状

1.2.1混合模式层析的研究进展

混合模式层析的概念最早于20世纪90年代被提出，随后在生物分离领域受到了广泛关注。国外学者在混合模式层析的基础理论和应用研究方面开展了大量工作，取得了许多重要成果。例如，在配基设计与合成方面，通过对各种功能基团的组合与优化，开发出了一系列具有独特性能的混合模式配基。美国的研究团队利用分子模拟技术，深入研究了配基与目标蛋白之间的相互作用机制，为新型配基的设计提供了理论指导。在介质制备技术上，国外不断探索新的材料和制备方法，以提高介质的性能和稳定性。如采用先进的微球制备技术，制备出了粒径均匀、孔径分布可控的混合模式层析介质，有效提高了分离效率和分辨率。

在国内，混合模式层析的研究也取得了显著进展。科研人员在借鉴国外先进技术的基础