怎样染好HE切片.pptVIP

染色中的疑惑1.染色中每一种试剂的作用？2.胃镜、内膜等细胞丰富的组织易染色深的处理方法？3.自动染色机与传统手工染色相比有哪些优缺点？4.染色用的分化液用时间长后里面是什么成分？是洗掉的苏木素？那这样分化的时候不就是在染色了吗？是被破坏的核从片子上掉下来了？谢谢大家！分类细胞核染料有天然染料苏木素、胭脂红及人工合成的染料结晶紫、甲苯胺蓝、甲基绿、美蓝、焦油紫等细胞质染料有人工合成的伊红Y、酸性复红、苦味酸、水溶性苯胺蓝等媒染剂为有些二价或三价金属物质，如铝、铁、铜、钨等可作为中介媒体物质，使原来几乎不与组织结合或结合能力很弱的部分染料（尤其是天然染料）着色；它主要是通过增加染料对组织中某一成份的亲和能力，自身又与染料或组织发生结合而发挥作用助染剂（促染剂）与媒染剂不同，它只加强染料的染色能力，而自身不参与染色反应分化剂（脱色剂、分色剂）用于退行性染色法中脱去组织过染的染料，降低着色颜色酸性分化剂0.5~1%的盐酸酒精（95%以下）或较稀的冰醋酸水溶液氧化分化剂苦味酸、铬酸、重铬酸钾、过锰酸钾等媒染分化剂既能促使组织和染料结合，又可使已经结合到组织上的染料脱离一、苏木素-伊红染色的基本原理苏木素和伊红染色是组织学中常规制片中最基本，也是应用最广泛的染色方法，故称常规染色（简称HE染色）苏木素（或苏木精）是一种天然的染料，易溶于酒精而微溶于水，是较好的细胞核碱性染料，并可将细胞中不同的结构分化出各种不同的颜色；苏木素分子须经氧化形成苏木红分子，才具有真正的染色能力；同时须配合适当的媒染剂以增强它对组织的亲和力，达到染色目的伊红（或曙红）是人工合成的煤焦油类染料，红色粉末状，易溶于水或酒精，为酸性细胞胞质染料；有伊红Y、B、BN等，常用的是伊红Y。伊红常作为苏木素的对比染色染料，染色中常需加助染剂和分化剂，使染色效果更加好苏木素来源及染色原理苏木素是一种天然染料，是从苏木素树（HaematoxylinCompechianum）的树心木提炼出来的。它原产于墨西哥的坎佩切（Campeche），因此而得名。它多生长在西印度群岛，虽然使用年限较早，但是着色性能一直很差。直到70年代苏木素有了新的提取方法，是将苏木树锯倒后剥去外皮，将树心木先用热水浸泡，再加尿素沉淀（Lamb，1974）后制成的染料才比较稳定。自从有苏木素以来，苏木素在单独使用时着色能力很差，但仍然是最常用的染细胞核的组织学染料。为了获得最佳的苏木素染色液必须具备以下两个条件：一是必须能产生有效成分苏木因（Haematein）；二是染色时需要加适量的媒染剂（如硫酸铝钾、氯化铁及硫酸铁胺等）。苏木因是由苏木素氧化而产生的，是按传统的方法暴露于阳光和空气之下，叫做熟化，需要3—4个月的时间。如用氧化剂使之快速成熟也可得到较好的结果，但是使用寿命不如自然氧化的苏木素。苏木素所以被称为染料是因为苏木素的分子氧化后成为生物染料——氧化苏木红。在常规苏木素伊红染色中，苏木素经过氧化变成酸性染料苏木红，苏木红与二价或三价的金属盐或氢氧化物结合形成带正电荷的蓝色色精，只有在这种情况下才能与细胞中带负电荷的脱氧核糖核酸结合完成染色。苏木红和媒染剂的结合不但较好地显示细胞核成分，还可与组织中的其他物质进行结合。苏木素呈淡黄色，用人工氧化的方法可以快速全部地将苏木素变成苏木红。但如果过氧化就会破坏染料的分子结构影响染色力。二、苏木素-伊红染液的配制（一）苏木素染液一种是将氧化剂（如氧化汞、高锰酸钾、过氧化氢或碘酸钠等）与媒染剂（硫酸铝铵、硫酸铝钾或硫酸铝铁等）直接混合于苏木素中配成溶液另一种是先用媒染剂媒染组织结构，再用氧化的苏木素（自然氧化）染色，最后用媒染剂分色Harris苏木素染液苏木素1g无水酒精10ml硫酸铝钾（或硫酸铝铵）20g蒸馏水