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重组蛋白Ag85A-IL-17A的构建及其对哮喘小鼠气道炎症干预机制的深度探究

一、引言

1.1研究背景与意义

哮喘作为一种常见的慢性炎症性气道疾病，近年来在全球范围内的发病率呈上升趋势，严重威胁着人类的健康。据世界卫生组织（WHO）统计，全球约有3亿人患有哮喘，且每年有超过25万人死于该疾病。在中国，哮喘的患病率也不容小觑，且儿童哮喘的发病率呈逐年上升之势，给患者及其家庭带来了沉重的经济负担和心理压力。

哮喘的发病机制极为复杂，涉及多种免疫细胞、细胞因子以及信号通路的相互作用。目前，临床上对于哮喘的治疗主要依赖于糖皮质激素和支气管扩张剂等药物。糖皮质激素虽能有效减轻炎症反应，但长期使用会带来诸多副作用，如骨质疏松、免疫抑制、肾上腺皮质功能减退等；支气管扩张剂则主要用于缓解哮喘发作时的症状，无法从根本上解决炎症问题。因此，开发一种安全、有效的新型治疗方法，成为了哮喘研究领域的迫切需求。

重组蛋白技术作为生物制药领域的重要手段，近年来在疾病治疗方面展现出了巨大的潜力。通过基因工程技术将不同功能的蛋白编码基因进行重组，可构建出具有特定生物学活性的重组蛋白。这些重组蛋白能够针对疾病发生发展过程中的关键靶点，发挥精准的治疗作用。在哮喘治疗研究中，构建重组蛋白为探索新的治疗策略提供了一条崭新的途径。

Ag85A是结核分枝杆菌中的一种重要分泌蛋白，具有良好的免疫原性，在免疫调节领域备受关注。研究表明，Ag85A能够激活机体的免疫系统，增强免疫细胞的活性，调节免疫应答。IL-17A作为一种促炎细胞因子，在哮喘的发病过程中扮演着关键角色。它能够诱导多种炎症细胞的浸润和活化，促进气道上皮细胞分泌趋化因子和细胞因子，加重气道炎症反应。然而，单独使用Ag85A或IL-17A治疗哮喘存在一定的局限性，难以达到理想的治疗效果。

本研究创新性地将Ag85A和IL-17A进行重组，构建出重组蛋白Ag85A-IL-17A。期望通过二者的协同作用，一方面利用Ag85A的免疫调节功能，激活机体的免疫防御机制，增强对哮喘炎症的抵抗能力；另一方面，通过对IL-17A活性的精准调控，阻断其介导的炎症信号通路，从而有效减轻哮喘小鼠的气道炎症。这不仅有助于深入揭示哮喘的发病机制，为哮喘的治疗提供新的理论依据，还可能为开发新型哮喘治疗药物奠定基础，具有重要的理论意义和临床应用价值。

1.2国内外研究现状

1.2.1哮喘治疗的研究现状

近年来，国内外在哮喘治疗领域开展了广泛而深入的研究。传统治疗方面，糖皮质激素依然是控制哮喘炎症的一线药物，通过抑制炎症细胞的活化和炎症介质的释放来减轻气道炎症。支气管扩张剂如β?受体激动剂、茶碱类药物等，能够舒张气道平滑肌，迅速缓解哮喘发作时的喘息症状。然而，长期或大剂量使用糖皮质激素带来的副作用问题一直备受关注，如儿童生长发育迟缓、成人骨质疏松、免疫力下降等，限制了其在临床的应用。

在新型治疗药物研发方面，靶向生物制剂成为研究热点。针对哮喘发病过程中关键的细胞因子、受体或信号通路，开发出一系列单克隆抗体药物。例如，奥马珠单抗（Omalizumab）特异性结合游离的IgE，减少IgE与肥大细胞和嗜碱性粒细胞表面受体的结合，从而降低炎症细胞的活化，对于中重度过敏性哮喘患者具有较好的疗效；美泊利单抗（Mepolizumab）、贝那利珠单抗（Benralizumab）等靶向嗜酸性粒细胞相关细胞因子（如IL-5等）的单克隆抗体，能够有效减少嗜酸性粒细胞在气道的浸润，改善哮喘患者的症状和肺功能。这些生物制剂为哮喘治疗带来了新的选择，但存在价格昂贵、需要长期注射给药、可能引发免疫相关不良反应等问题，限制了其广泛应用。

此外，中医中药在哮喘治疗中也发挥着一定作用。中医通过辨证论治，采用中药复方、针灸、穴位贴敷等方法调节机体的整体功能，改善患者的免疫状态和气道炎症。一些研究表明，中药能够减轻哮喘患者的症状，减少发作次数，且副作用相对较小。然而，中医治疗哮喘的机制尚不完全明确，缺乏大规模、多中心、随机对照临床试验的验证，其临床应用的规范性和标准化有待进一步提高。

1.2.2重组蛋白构建及应用的研究现状

在重组蛋白构建技术方面，随着基因工程技术的飞速发展，已经建立了多种高效的重组蛋白表达系统，包括原核表达系统（如大肠杆菌）、真核表达系统（如酵母、昆虫细胞、哺乳动物细胞等）。大肠杆菌表达系统具有生长迅速、操作简单、成本低等优点，适合大规模生产重组蛋白，但存在蛋白质翻译后修饰不完善、易形成包涵体等问题；真核表达系统能够对重组蛋白进行正确的折叠和修饰，表达的蛋白更接近天然状态，但其培养条件复杂、成本较高。研究者们不断优化表达系统和表达条件，以提高重组蛋白的表达量和活性。

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