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总RNA提取操作步骤
2.1实验原理
Trizol是一种新型的总RNA即用型制备试剂,适用于从各种组织或细胞中快速分离总RNA。Trizol试剂是由苯酚和异硫氰酸胍配制而成的单相的快速抽提总RNA的试剂,在匀浆和裂解过程中,能在破碎细胞、降解细胞其它成分的同时保持RNA的完整性。在氯仿抽提、离心分离后,RNA处于水相中,将水相转管后用异丙醇沉淀RNA。
Trizol的主要成分是酚,主要作用是裂解细胞,使细胞中的蛋白、核酸物质解聚得到释放。但酚虽可有效的变性蛋白质,却不能完全抑制RNA酶活性,因此Trizol中还加入了8-羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase
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