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鸡TLR4基因变异剖析及TLRs基因与沙门氏菌感染的关联探究

一、引言

1.1研究背景

1.1.1TLR4基因研究进展

TLR4基因编码的Toll样受体4（TLR4）是Toll样受体家族的重要成员，属于Ⅰ型跨膜蛋白受体。在鸡中，TLR4基因位于17号染色体，全长4452bp，包含三个外显子，编码843个氨基酸。其结构由胞外区、跨膜区和胞质区三部分构成。胞外区含有15-29个亮氨酸重复序列（LRR），这些LRR结构有助于识别病原体微生物及其产物，还可与CD14分子中的亮氨酸重复序列结合，介导蛋白质之间的相互作用。胞内区则由一段与IL-1受体胞内区保守序列具有高度同源性的TIR结构域和跨膜结构域组成，TIR结构域中含有3个高度保守区，在TLRs和信号传导衔接蛋白的蛋白质中发挥着关键作用。

TLR4在免疫反应中扮演着至关重要的角色，主要识别革兰氏阴性菌细胞膜上的重要成分脂多糖（LPS）。当TLR4识别到LPS后，会激活一系列信号传导通路，启动免疫细胞的活化和炎症反应。比如，它可以激活核因子-κB（NF-κB）信号通路，促使免疫细胞产生和释放多种细胞因子，如肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）等，这些细胞因子对于抵御病原体入侵、调节免疫细胞的功能和炎症反应的进程具有重要意义。在机体受到革兰氏阴性菌感染时，TLR4能够迅速识别细菌表面的LPS，激活下游信号通路，促使巨噬细胞、单核细胞等免疫细胞分泌TNF-α和IL-6等细胞因子，引发炎症反应，以清除病原体。

在疾病研究方面，TLR4基因的多态性与多种疾病的发生发展密切相关。在人类医学领域，研究发现TLR4基因的Asp299Gly和Thr399Ile多态性与吸入LPS后的低应答相关，并且在G-细菌引起的中毒性休克中起一定作用。在禽类研究中，有学者分析了鸡TLR4第三外显子单核苷酸多态性（SNPs）及其基因表达水平与沙门氏菌感染的相关性。基因的功能最终通过蛋白来行使，TLR4基因的变异也是通过改变TLR4蛋白结构而发挥作用。不同物种的TLR4对内毒素（LPS）表现出不同的效应，如小鼠TLR4对LPS以及同源物LA-14-PP都能引发内毒素生物学效应，而人类仅对LPS发生激动效应，对LA-14-PP则为拮抗效应。这表明TLR4在不同物种中的功能存在一定差异，这种差异可能与物种的进化、生存环境以及免疫需求有关。

1.1.2TLRs基因家族概述

Toll样受体（TLRs）基因家族是天然免疫系统中一类模式识别受体（PRRs），是一类在进化上高度保守的蛋白质家族，广泛存在于昆虫、植物和脊椎动物中。在哺乳动物及人类中，目前已经发现的TLRs家族成员有11个。人的TLRs家族基因定位具有一定特点，如（TLR1、TLR2、TLR3、TLR6、TLR10）定位于4号染色体，TLR4位于9号染色体，TLR5位于1号染色体，TLR9位于3号染色体，TLR7、TLR8位于x号染色体。根据TLRs细胞分布特征，可将其分为普遍存在型（TLR1）、限制存在型（TLR2、TLR4、TLR5）及特异存在型（TLR3）3类；根据染色体的位置、基因结构和氨基酸序列，人的TLRs受体又可以分为5个亚科，即TLR2亚科（包含TLR1、TLR2、TLR6和TLR10）、TLR9亚科（包含TLR7、TLR8和TLR9），以及TLR3、TLR4和TLR5各自形成的一个亚科。

TLRs家族成员均为Ⅰ型跨膜蛋白，结构上都由胞外区、跨膜区和胞质区构成。胞外区长度为550-980氨基酸不等，含有18-31个富亮氨酸重复序列（LRRs），可能含有多个配体结合位点，不同的TLR可能受不同的配体活化，这也导致了TLRs胞外区同源性较差，如hTLR4与hTLR2只有24%相同。胞内区长度约为200个氨基酸，与IL-1R的胞内区非常接近，又称为TIR域（Toll/1L-1-receptorhomologousregion），在信号传导中功能十分重要。

TLRs在识别病原体和激活免疫反应中起着关键作用。它们能够特异性地识别病原相关分子模式（PAMP），这些PAMP是病原体所特有的一些保守分子结构，如细菌的脂多糖、肽聚糖，病毒的双链RNA等。当TLRs识别到相应的PAMP后，会通过细胞内的信号传导通路激活免疫细胞，启动天然免疫反应，同时也为获得性免疫反应的启动提供信号。不同的TLRs识别不同类型