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A群猪轮状病毒胶体金免疫层析试纸条的制备与性能研究

一、引言

1.1研究背景与意义

猪轮状病毒（PorcineRotavirus，PoRV）是引起仔猪病毒性腹泻的主要病原体之一，属于呼肠孤病毒科轮状病毒属成员，其基因组由11条不连续、分节段的双链RNA组成，编码6种结构蛋白与6种非结构蛋白。依据VP6蛋白的差异，可将轮状病毒分为A、B、C、H等多个群，在猪群中，主要是A群和C群感染较为常见，而我国则以A群轮状病毒（PorcineRotavirusA，PoRVA）的流行为主。PoRVA能引发仔猪急性肠胃炎，感染后的仔猪会迅速出现腹泻症状，严重时常常因脱水而死亡。

近年来，PoRVA在全球范围内的猪群中广泛传播，给养猪业造成了巨大的经济损失。南京农业大学等单位在2024年3月发表的研究成果显示，对2022年我国23个省份的230个不同猪场共25768份腹泻仔猪样品进行猪轮状病毒的qPCR检测，结果表明整体上猪场阳性率高达86.52%，样品阳性率高达51.15%。不同地区的感染情况存在差异，陕西地区样品阳性率最低为29.94%，黑龙江地区阳性率最高为87.1%；23个省份中有12个省份样品阳性率超过50%，19个省份猪场阳性率超过80%。从基因型上看，G9（56.55%）、G5（14.48%）、G1（8.97%）为主要的G型，P[13]（42.22%）、P[23]（25.56%）、P[7]（22.22%）为主要的P型；G9P[23]（22.87%）、G9P[13]（15.19%）、G5P[13]（13.92%）、G9P[7]（10.13%）是优势的基因组合型。

传统的猪轮状病毒检测方法，如病毒分离培养鉴定、病毒电镜形态检查、酶联免疫吸附试验（ELISA）、反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、实时荧光定量RT-PCR（RT-qPCR）和逆转录-环介导等温核酸扩增技术（RT-LAMP）、原位杂交技术（ISH）等，虽然在一定程度上能够准确检测病毒，但存在各自的局限性。病毒分离培养鉴定操作繁琐，耗时较长，对实验条件要求高；病毒电镜形态检查需要昂贵的设备和专业技术人员；ELISA检测灵敏度有限，且操作步骤较为复杂；RT-PCR、RT-qPCR和RT-LAMP等分子生物学方法虽然灵敏度高、特异性强，但需要专业的仪器设备和技术人员，检测成本较高，不适用于现场快速检测；原位杂交技术操作复杂，检测时间长，也难以满足实际生产中的快速检测需求。

胶体金免疫层析试纸条技术作为一种新型的免疫检测方法，具有操作简便、快速、灵敏度高、特异性强、不需要特殊仪器设备等优点，在病毒检测领域得到了广泛的应用。该技术以胶体金为指示剂，利用抗原-抗体反应的特异性，将特异性抗体或抗原固定在试纸条上，当加入待测样本后，样本中的抗原或抗体与固定在试纸条上的抗体或抗原发生特异性结合，形成抗原-抗体复合物，通过观察颜色反应来判断检测结果。在猪轮状病毒检测方面，开发一种快速、准确、便捷的胶体金免疫层析试纸条具有重要的现实意义。它能够实现对猪轮状病毒的现场快速检测，及时发现疫情，为养猪业的疫病防控提供有力的技术支持，有助于减少经济损失，保障养猪业的健康发展。

1.2国内外研究现状

在A群猪轮状病毒检测技术的研究方面，国内外已经取得了一系列成果，但也存在着各自的局限性。传统的检测方法如病毒分离培养鉴定，是确诊轮状病毒病的金标准，能够直观地观察病毒粒子。美国学者在早期对轮状病毒的研究中，就通过细胞培养成功分离出病毒，但该方法操作极为繁琐，耗时往往长达数天甚至数周，对实验条件要求苛刻，需要专业的细胞培养设备和严格的无菌操作环境，这使得其在实际生产中的快速检测应用受到极大限制。

病毒电镜形态检查同样需要昂贵的电子显微镜设备以及具备专业知识的技术人员进行操作和分析，成本高昂且效率较低，难以满足大量样本的快速检测需求。免疫学检测方法中的酶联免疫吸附试验（ELISA），相对操作较为简单，特异性和灵敏度也较高，在临床中可满足样本量大、快速检测的需求。有研究团队利用双抗体夹心ELISA对猪轮状病毒进行检测，取得了较好的效果，但该方法仍存在灵敏度有限的问题，对于低浓度病毒样本可能出现漏检情况。

分子生物学检测方法中，反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）具有较高的特异性和灵敏度，能够检测到病料中的微量病原，是实验室检测轮状病毒常用的方法之一。实时荧光定量RT-PCR（RT-qPCR）不仅能检测病毒，还可对病毒进行定量分析，大大提高了检测的准确性和效率。逆转录-环介导等温核酸扩增技术（RT-