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理论探索THEORETICALEXPLORATION

爆珠生产过程中微生物区系变化特征分析

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何.思..葛洪强..许春雨..刘文欣..张远方..

1山东将军烟草新材料科技有限公司..山东..济南..250104；2将军烟草集团有限公司..山东..济南..250100

采用16SrRNA测序技术探索爆珠生产过程中微生物的多样性及其分布与变化情况。结果表明，在爆珠

摘要：

的生产过程中，微生物种类多样性整体呈现增加趋势，且不同生产阶段的微生物群落结构存在明显差异。在属

水平上，共鉴定出81菌属，在化胶、滴制和洗丸过程中嗜热杆菌属、假单胞菌属和不动杆菌属是主要的优势菌属，

水杆菌属、假单胞菌属、不动杆菌属、鞘氨醇单胞菌属在干燥、生产和平衡环节中占绝对优势。

关键词：爆珠；高通量测序；细菌多样性；动态演变

引言为T1：化胶，T2：滴制，T3：洗丸，T4：干燥，T5：筛

选，T6：平衡。重复3次取样，样品采集后用无菌塑封

爆珠用于卷烟的过滤嘴中，是卷烟赋香增味的重要

袋密封，并及时送至上海派森诺生物科技股份有限公司

手段之一。爆珠制造工艺主要采用滴制法，将壁材和内

进行测序分析。

容物通过滴头体形成同心流柱，对其均匀切割成柱段，在

表面张力的作用下形成胶丸，滴入成形介质中冷凝，形

成爆珠。生产链所有步骤的生产活动中存在种类繁多的

微生物，虽然部分功能性微生物能够减少有害物质前体

的含量，但其过度繁殖可能导致爆珠生产过程中出现腐

败或霉变等问题，不仅影响产品质量，还对生产人员及

消费者的健康构成威胁。

图1样品来源分布流程图

随着科技的进步，以Illumina平台为代表的第二代

测序技术实现了高通量测序，能一次并行对几十万到1.2样品基因组DNA提取及测序

几百万条DNA分子进行序列测定[1]，分析生物种类的提取样品的基因组DNA，利用紫外分光光度仪结合

DNA序列成为可能，在诸多领域得到广泛应用[2，3]，然1.5%琼脂糖凝胶电泳技术，对提取的DNA样品进行浓

而，将此项技术应用于爆珠生产过程中微生物多样性的度和纯度的综合评估。使用338F和806R引物扩增细

分析，相关研究仍然较为稀缺。为此，拟利用高通量测菌16SrRNA的V3-V4高变区。PCR扩增的反应体系

序技术，对爆珠生产工艺流程中的细菌群落结构组成及包含：5×reactionbuffer5μL，5×GCbuffer5μL，

主要类群的相对丰度进行分析，深入探究生产环境中微dNTPs5μL，515F1μL，907R1μL，DNA2μL，

生物的分布特征及其动态变化规律，旨在为爆珠生产过ddH2O6μL。扩增参数设定为：95℃预变性2min；

程中有益微生物资源的开发与利用，以及有害微生物的95℃变性15s，55℃退火30s，72℃延伸30s，共进

有效防控提供科学依据和理论支持。行30个循环；最后72℃终延伸5min，10℃保温。将

来自同一样本的PCR产物混合后，经过2%琼脂糖凝胶

1.材料与方法

电泳纯化回收。回收的产物进