靶向hTERT基因的siRNA对胰腺癌抑制作用的体外实验剖析.docxVIP

靶向hTERT基因的siRNA对胰腺癌抑制作用的体外实验剖析

一、引言

1.1研究背景

胰腺癌作为消化系统中极具侵袭性的恶性肿瘤，其发病率在全球范围内呈现出逐渐上升的趋势，严重威胁着人类的健康。据相关统计数据显示，在我国，胰腺癌的发病率已达到十万分之5.1，且死亡率与发病率近乎持平，5年生存率更是低于7%，这一数据远远低于其他常见恶性肿瘤，如乳腺癌、结直肠癌等。胰腺癌发病隐匿，早期症状不明显，多数患者确诊时已处于中晚期，此时肿瘤往往已发生局部浸润或远处转移，手术切除率极低，仅约20%的患者有机会接受根治性手术治疗。即使接受了手术，术后复发率也很高，预后效果极差，因此被称为“癌中之王”。

目前，临床上针对胰腺癌的治疗手段主要包括手术、化疗、放疗和靶向治疗等。手术切除是唯一可能治愈胰腺癌的方法，但由于早期诊断困难，大部分患者确诊时已错过最佳手术时机。化疗是中晚期胰腺癌的重要治疗手段之一，常用药物如吉西他滨、纳米白蛋白紫杉醇等，虽能在一定程度上延长患者生存期，但总体疗效有限，且患者易产生耐药性，同时化疗药物的副作用也会严重影响患者的生活质量。放疗通过放射线杀死癌细胞，可用于局部晚期胰腺癌的治疗，但也存在对正常组织损伤较大等问题。靶向治疗作为一种新兴的治疗方法，虽具有一定的疗效，但目前针对胰腺癌的有效靶向药物有限，且同样面临耐药等问题。

随着对肿瘤发病机制研究的不断深入，基因治疗逐渐成为肿瘤治疗领域的研究热点。基因治疗旨在通过对异常基因的修复、替换或调控，从根本上治疗疾病。在众多与肿瘤发生发展相关的基因中，人类端粒酶逆转录酶（humantelomerasereversetranscriptase，hTERT）基因备受关注。端粒酶是一种能够维持端粒长度的核糖核蛋白酶，在正常体细胞中，端粒酶活性受到严格调控，表达水平极低；而在大多数肿瘤细胞中，端粒酶活性异常升高，其中hTERT作为端粒酶的催化亚单位，其高表达与肿瘤细胞的增殖、分化、侵袭和转移密切相关。研究表明，hTERT在胰腺癌组织中的表达明显高于正常胰腺组织，且其表达水平与胰腺癌的恶性程度、预后等密切相关。因此，以hTERT基因为靶点，通过抑制其表达来阻断端粒酶活性，进而抑制胰腺癌细胞的生长和增殖，为胰腺癌的治疗提供了新的思路和方法。

RNA干扰（RNAinterference，RNAi）技术是一种由小干扰RNA（smallinterferingRNA，siRNA）介导的转录后基因沉默机制，能够特异性地降解靶mRNA，从而高效、特异地抑制靶基因的表达。siRNA具有高度的序列特异性，能够精确地识别并结合与之互补的靶mRNA序列，在核酸酶的作用下将其降解，实现对特定基因表达的调控。与传统的基因治疗方法相比，RNAi技术具有作用高效、特异性强、操作简便等优点，为肿瘤基因治疗提供了有力的工具。将RNAi技术应用于靶向hTERT基因的治疗研究，有望开发出一种高效、低毒的胰腺癌治疗新策略。

1.2hTERT基因与胰腺癌的关联

端粒是位于真核细胞染色体末端的特殊结构，由重复的DNA序列和相关蛋白质组成，其主要功能是保护染色体的完整性和稳定性，防止染色体末端融合、降解和重组。在正常体细胞分裂过程中，由于DNA聚合酶无法完全复制染色体末端的端粒序列，每分裂一次，端粒就会缩短一段长度。当端粒缩短到一定程度时，细胞会进入衰老或凋亡状态，这被认为是细胞衰老和死亡的重要机制之一。而端粒酶是一种能够维持端粒长度的核糖核蛋白酶，它由RNA模板和蛋白质亚单位组成，其中hTERT是端粒酶的关键催化亚单位，在端粒酶的激活和维持端粒长度的过程中发挥着不可或缺的作用。

在正常生理情况下，hTERT基因的表达受到严格的调控，仅在干细胞、生殖细胞等具有高度增殖能力的细胞中低水平表达，以维持这些细胞的正常分裂和更新。而在大多数肿瘤细胞中，hTERT基因的表达发生异常改变，呈现出高表达的状态。这种高表达使得端粒酶活性显著增强，肿瘤细胞能够不断合成端粒DNA，补偿因细胞分裂而导致的端粒缩短，从而逃避细胞衰老和凋亡的命运，获得无限增殖的能力。研究表明，hTERT基因的异常激活与肿瘤的发生、发展密切相关，在多种恶性肿瘤中，如乳腺癌、肺癌、结直肠癌等，均检测到hTERT基因的高表达，且其表达水平与肿瘤的恶性程度、转移潜能和预后密切相关。

在胰腺癌中，hTERT基因同样表现出高表达的特征。众多研究通过免疫组织化学、实时荧光定量PCR、Westernblot等技术手段，对胰腺癌组织和正常胰腺组织中的hTERT表达进行检测分析，结果一致显示胰腺癌组织中hTERT的mRNA和蛋白表达水平显著高于正常胰腺组织。李赞滨等人运用免疫