《人脑胶质瘤类器官制备、鉴定、冻存和复苏操作指南》（征求意见稿）.docx

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人脑胶质瘤类器官制备、鉴定、冻存和复苏操作指南

1范围

本指南提供了人脑胶质瘤类器官的制备、鉴定、传代、冻存和复苏等的规范性操作和推荐方法。本指南适用于医疗院校，科研机构、医药企业等人员构建人脑胶质瘤类器官。

注：在不引起混淆的情况下，本《人脑胶质瘤类器官制备、鉴定、冻存和复苏操作指南》，简称为“本指南”。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用，而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB19489-2008实验室生物安全通用要求至少引用一次

至少引用一次

GB39707-2020医疗废物处理处置污染控制标准

GB/T38736-2020人类生物样本保藏伦理要求

GB/T37864-2019生物样本库质量和能力通用要求至少引用一次

至少引用一次

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。GB/T38736-2020界定的以及下列术语和定义适用于本指南。3.1

类器官organoids

由干细胞或前体细胞体外培养形成的微型三维细胞培养物，能高度模拟体内对应组织器官的细胞类型组成、形态结构和生理功能等特征。

3.2

人脑胶质瘤类器官humangliomaorganoids

由人脑胶质瘤来源的肿瘤干细胞，在悬浮培养条件下形成的可模拟肿瘤组织细胞成分、组织结构及分子表型等关键特征具有相似性的三维多细胞培养物。

3.3

鉴定identification

类器官培养成功之后，通过形态学、病理学、基因组学等验证其与源组织的一致性。3.4

传代passage

将培养成功的类器官制备为单细胞或细胞簇后再进行培养，使其形成与上一代类器官有着相同形态功能的新一代类器官的过程。

3.5

冻存cryopreservation

将类器官置于低温条件下，使其暂停生长，但不影响其活性及状态的长期保存的过程。

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3.6

复苏recovery

将冻存的类器官取出解冻后再进行相应培养，恢复其继续生长能力的过程。

3.7

组织保存液tissuepreservationsolution

在离体后（从生物体取出后）为尽可能长时间地维持生物组织样本的形态结构、生化成分、细胞活力或核酸/蛋白质完整性而配制的液体溶液。

3.8

知情同意informedconsent

见GB/T38736-2020第3.7条。

4总则

4.1人类组织样本采集与处理应符合GB/T37864-2019的要求。

4.2脑胶质瘤类器官生物样本库应制定成文和实施适宜的组织样本采集和处理的程序。该程序应可供负责组织样本采集者使用，不论其是否为生物样本库人员。

4.3脑胶质瘤类器官生物样本库应建立适当的质量管理体系确保符合用户需求并持续改进。

4.4脑胶质瘤类器官生物样本库应具备相关的资质和设施环境。

4.5脑胶质瘤类器官研究项目应通过伦理审查并履行知情同意程序。

4.6脑胶质瘤类器官生物样本库管理制度应为组织提供者提供足够的隐私保护，确保为用户/参与者个人信息的保密性。

5胶质瘤类器官制备

5.1制备原理

在脑胶质瘤培养基作用下，脑胶质瘤的成体干细胞自我增殖，自我分化成一个三维（3D）的，具有一定空间结构的组织类似物。

5.2组织样本采集

5.2.1实验室及相关人员应建立起相应的生物安全管控体系，严格控制供体相关疾病传播的风险。

5.2.2组织样本的获取及处理人员需接受相应的培训，具备相应操作能力及防护能力。

5.2.3供体组织应当由具有相应医疗资质的机构提供，脑胶质瘤组织样本通过手术切除/穿刺的人脑胶质瘤组织中选取（在满足临床病理诊断需求后剩余组织才可做类器官），建议组织离体后10分钟内完成取样，取样后马上放入无菌组织保存液中，取样时应选择肿瘤组织丰富，活性好的部位，至少0.5g（建议1g以上）。

5.3组织样本的保存和运输

5.3.1采集样本前备物

无菌组织保存液（保存液应适合保存、转运、不影响组织细胞的生理功能）、组织保存管或离心管、试管架、冰袋、转运箱。

5.3.2采集的组织样本应完全浸没于含无菌组织保存液的无菌保存管中，严格控制转运温度，建议在低

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温（2℃~8℃)条件下进行保存和运输，转运过程中应持续监控温度并可溯源，应在48小时内到达实验室，尽快处理样本。

5.4类器官培养、鉴定和传代

实验前准备：实验开始前建议生物安全柜提前紫外线消毒30min，所有类器官的制备、培养、冻存和复苏应在生物安全柜中保证无菌操作。所用试剂、