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肝细胞体外长期培养的传代与扩增技术

肝细胞体外长期培养的传代与扩增技术

肝细胞是人体最重要的代谢器官之一，但是由于肝脏的特殊结构和功能，使其难以从正常人身上取得充分数量的健康、活性的肝细胞以供研究使用。而对于许多肝病的研究以及药物的安全性和有效性评价等方面，需要大量的活性肝细胞。因此，体外肝细胞培养技术应运而生。目前的肝细胞体外培养技术可以分为短期培养和长期培养。由于肝细胞短期培养失去重要的生化功能，长期培养技术得到了越来越广泛的应用。

肝细胞体外长期培养存在的问题

尽管现有的肝细胞体外长期培养技术已经取得了一定的进展，但是仍存在以下问题：

1、不易传代

2、易发生红染色体变异

3、生长速率缓慢

4、严格的培养条件要求

本方案结合已有的肝细胞体外长期培养技术，探索出适合我们实验室的肝细胞体外长期培养技术，并有效解决上述存在的问题。具体技术路线如下：

1、选择原代肝细胞

从新鲜的肝脏组织中获取肝细胞，通过组织块法切割、胶原酶法分离肝细胞，用细胞培养基将其保持在低温下。

2、传代subcultured

当肝细胞原代培养至80%-90%的接触抑制时，将其用0.25%的胰蛋白酶牛血清白蛋白溶液（trypsin/chelatedanimalserumalbuminsolution）进行消化，并停止酶反应。将细胞洗涤后，用培养基进行重悬打散。接种细胞培养瓶中，按照1∶2、1∶3、1∶