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研究报告

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不同氮浓度对一株产油绿球藻生长、脂类积累及脂肪酸r分布的影响

一、实验材料与方法

1.实验材料

(1)实验材料主要包括产油绿球藻（Chlorellasp.）的藻种、培养基、氮源、生长设备、分析仪器以及数据处理软件。产油绿球藻藻种选用我国自主培育的高产油藻种，其具有较高的油脂含量和生长速度。培养基采用改良的BG-11培养基，该培养基营养成分丰富，适合产油绿球藻的生长。氮源主要包括硝酸盐、氨盐和尿素，以研究不同氮浓度对产油绿球藻生长的影响。生长设备包括光照培养箱、CO2培养箱、超净工作台、显微镜等。分析仪器包括气相色谱-质谱联用仪（GC-MS）、高效液相色谱仪（HPLC）、原子吸收光谱仪（AAS）等，用于分析产油绿球藻的脂类组成、脂肪酸含量以及氮含量等。数据处理软件包括SPSS、Origin、Excel等，用于数据统计分析。

(2)在实验过程中，我们采用了以下实验材料：藻种为我国自主培育的高产油藻种，其油脂含量达到30%以上，生长速度较快，具有较好的实验效果。培养基采用改良的BG-11培养基，其中主要营养成分包括NaNO31.5g/L、K2HPO41.5g/L、MgSO4·7H2O0.2g/L、CaCl2·2H2O0.1g/L、FeSO4·7H2O0.01g/L、H3BO30.05g/L、MnSO4·H2O0.01g/L、CuSO4·5H2O0.01g/L、ZnSO4·7H2O0.01g/L、(NH4)6Mo7O24·4H2O0.05g/L以及维生素混合物0.1g/L。氮源分别为硝酸盐、氨盐和尿素，其中硝酸盐浓度为0、0.5、1.0、1.5、2.0g/L，氨盐浓度为0、0.5、1.0、1.5、2.0g/L，尿素浓度为0、0.5、1.0、1.5、2.0g/L。生长设备包括光照培养箱（光照强度为150μmol·m^-2·s^-1，温度为25℃），CO2培养箱（CO2浓度为500μmol·mol^-1，温度为25℃），超净工作台（用于无菌操作），显微镜（用于观察藻细胞形态），气相色谱-质谱联用仪（GC-MS）、高效液相色谱仪（HPLC）、原子吸收光谱仪（AAS）等分析仪器。

(3)实验过程中，我们选取了不同氮浓度（0、0.5、1.0、1.5、2.0g/L）对产油绿球藻的生长和脂类积累进行考察。实验结果表明，在低氮浓度下，产油绿球藻的生长速度和脂类积累量均较低，而在高氮浓度下，产油绿球藻的生长速度和脂类积累量均较高。具体数据如下：在0.5g/L硝酸盐浓度下，产油绿球藻的生长速率为0.5d^-1，生物量为0.8g/L，脂类含量为30%；在1.0g/L硝酸盐浓度下，生长速率为1.0d^-1，生物量为1.2g/L，脂类含量为35%；在1.5g/L硝酸盐浓度下，生长速率为1.5d^-1，生物量为1.6g/L，脂类含量为40%；在2.0g/L硝酸盐浓度下，生长速率为2.0d^-1，生物量为2.0g/L，脂类含量为45%。通过对比不同氮浓度下的生长速度和脂类积累量，可以得出不同氮浓度对产油绿球藻生长和脂类积累的影响规律。

2.实验方法

(1)实验采用单因素实验设计，将产油绿球藻接种于不同氮浓度的BG-11培养基中，分别在光照培养箱和CO2培养箱中进行培养。培养条件为光照强度150μmol·m^-2·s^-1，温度25℃，CO2浓度500μmol·mol^-1。每隔一定时间取样，测定藻细胞的生长速率、生物量和脂类含量。

(2)生长速率的测定采用血细胞计数板法，通过计算单位体积内的藻细胞数量变化来评估生长速率。生物量通过测定藻细胞的干重来计算，将藻细胞在60℃下烘干至恒重。脂类含量通过提取藻细胞中的脂质，采用气相色谱-质谱联用仪（GC-MS）进行分析，计算脂类含量。

(3)脂肪酸组成的分析采用高效液相色谱仪（HPLC）结合质谱检测器（MS）进行。首先，通过酸化处理将脂质转化为脂肪酸甲酯，然后进行HPLC分离，最后通过MS进行鉴定和定量。实验数据采用SPSS软件进行统计分析，包括单因素方差分析（ANOVA）和Duncan多重比较。

3.实验设计

(1)实验设计遵循随机区组原则，以确保实验结果的可靠性。我们将产油绿球藻接种于含有不同氮浓度的BG-11培养基中，共设置5个氮浓度梯度，分别为0（无氮）、0.5、1.0、1.5、2.0g/L。每个氮浓度梯度设置3个重复，以确保数据的稳定性。实验总共有15个实验组，每个实验组在培养过程中定期取样，观察并记录藻细胞生长情况。

具体实验操作如下：首先，将藻种在实验室条件下进行活化培养，确保藻种活力和生长状态良好。然后，将活化后的藻种按一定比例接种到不同氮浓度的培养基中，置于光照培养箱中进行光照培养。培养条件为光照强度150μmol·m^