猪传染性胸膜肺炎重组亚单位菌苗：从研制到应用的深度剖析.docxVIP

猪传染性胸膜肺炎重组亚单位菌苗：从研制到应用的深度剖析

一、引言

1.1研究背景与意义

猪传染性胸膜肺炎（PorcineContagiousPleuropneumonia，PCP）是由胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacilluspleuropneumoniae，APP）引起的一种以胸膜炎和肺炎为主要特征的高度接触性呼吸道传染病。自1957年英国人首次报道以来，该病在全球范围内广泛传播，给养猪业带来了巨大的经济损失，已成为危害现代养猪业的重要疫病之一。

APP属于革兰氏阴性菌，根据培养时对辅酶I（NAD）的依赖性，可分为生物I型和生物II型，其中生物I型对猪具有致病性。依据荚膜抗原与细菌脂多糖的不同，生物I型又可细分为12个血清型（血清型又有5a、5b亚型），各个血清型之间交叉反应较差。这意味着针对某一血清型研发的疫苗或药物，对其他血清型的防控效果可能不佳，极大地增加了疾病防控的难度。

各年龄阶段的猪均对APP易感，尤其断奶仔猪多发。在急性病型中，发病率一般为85-100%，死亡率在40-100%之间。如在一些规模化猪场，当APP疫情爆发时，急性型病例可导致大量仔猪迅速死亡，给养殖户带来沉重的打击。除了直接的死亡损失，患病猪生长缓慢、饲料转化率降低，康复猪也可能成为带菌者，持续向外界排毒，进一步传播疾病，使得疫情难以彻底根除。

在我国，随着养猪业规模化、集约化程度的不断提高，猪传染性胸膜肺炎的发病情况日益严重。朱世盛早在1988年就从进口种猪中检测出APP抗体阳性猪，1990年杨旭夫等首次正式确认我国大型集约化养猪场有猪APP存在，并分离出致病菌确定了血清型。高林等1994年的调查表明，当时猪APP在国内集约化猪场的感染发病日益增高，造成了重大损失。此后，相关研究和报道不断涌现，各地猪场均有不同程度的APP感染情况发生，严重制约了养猪业的健康发展。

目前，药物防治是控制猪传染性胸膜肺炎的常用手段之一，但APP极易产生耐药性，且不同血清型之间耐药性存在差异，使得药物治疗效果往往不尽人意。长期大量使用抗生素不仅增加了养殖成本，还可能导致药物残留，威胁食品安全和公共卫生安全。因此，研制有效的疫苗成为防控猪传染性胸膜肺炎的关键措施。

传统的疫苗如加热灭活和福尔马林灭活油剂苗，虽然制作方法简单、成本低廉，但由于APP血清型众多且交叉保护力弱，针对一种或几种血清型制备的灭活苗无法有效抵御其他血清型的感染。胸膜肺炎放线杆菌自家苗虽能针对特定致病因素产生对应抗体，有效控制疾病，但生产原料取自猪的病变组织，无法批量生产，且需在猪场发病后制作，不能起到预防作用。胸膜肺炎放线杆菌荚膜疫苗虽抗原性好，但生产技术含量高，推广难度较大。

重组亚单位菌苗作为一种新型疫苗，具有安全、高效、可大规模生产等优点，成为当前猪传染性胸膜肺炎疫苗研究的热点。它通过基因工程技术，将APP的关键毒力因子或抗原基因进行克隆和表达，制备成疫苗。这些毒力因子和抗原如溶血素、外毒素、荚膜多糖等，是引发机体免疫反应的重要物质。利用重组亚单位菌苗，能够刺激猪体产生特异性的免疫应答，包括体液免疫和细胞免疫，从而有效预防猪传染性胸膜肺炎的发生。

本研究旨在深入开展猪传染性胸膜肺炎重组亚单位菌苗的研究，通过对APP毒力因子和抗原的筛选、基因克隆与表达、疫苗制备工艺优化以及免疫效果评价等一系列研究工作，研制出一种高效、安全、稳定的重组亚单位菌苗，为猪传染性胸膜肺炎的防控提供新的技术手段和产品支持，对于保障我国养猪业的健康发展、提高养殖经济效益、维护食品安全和公共卫生安全具有重要的现实意义。

1.2国内外研究现状

猪传染性胸膜肺炎重组亚单位菌苗的研究在国内外都受到了广泛关注，众多科研人员围绕疫苗的关键毒力因子和抗原筛选、基因克隆与表达以及免疫效果评估等方面开展了深入研究，取得了一系列成果，但也存在一些不足之处。

在国外，对于APP毒力因子和抗原的研究起步较早且较为深入。溶血毒素（Apx）作为APP的重要毒力因子，被广泛研究。研究发现，不同血清型的APP分泌的Apx种类和含量存在差异，其中ApxⅠ、ApxⅡ、ApxⅢ对猪具有较强的毒性，能够破坏猪的呼吸道上皮细胞和免疫细胞，在致病过程中发挥关键作用。外膜蛋白（OMP）也是重要的研究对象，其抗原性相对保守，具有良好的免疫原性，能刺激机体产生免疫应答。有研究利用基因工程技术将编码OMP的基因克隆到表达载体中，在大肠杆菌或其他表达系统中成功表达出重组OMP，并将其作为亚单位疫苗的候选抗原进行免疫效果评估。

在疫苗的基因克隆与表达方面，国外科研团队在构建高效表达系统上取得了显著进展。通过优化表达载体的启动子、增强子等元