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狂犬病重组疫苗株的剂量依赖与攻毒保护效应探究

一、引言

1.1狂犬病病毒研究进展

1.1.1病毒结构与分类

狂犬病病毒（Rabiesvirus，RABV）属于弹状病毒科狂犬病病毒属，是一种嗜神经性病毒，其形态独特，形似子弹状，一端钝圆，另一端扁平。病毒粒子的平均大小为（130-300）nm×（60-85）nm，外层有包膜包裹，包膜由糖蛋白和内层基质蛋白M2组成，表面存在由糖蛋白构成的棘状凸起，这些棘状凸起在病毒与宿主细胞的识别和结合过程中发挥关键作用。内层为间质蛋白，中央则是紧密的螺旋状核衣壳，由单链RNA、核蛋白、大蛋白和磷酸化蛋白组成。狂犬病病毒的基因组为不分节段的单负链RNA（-ssRNA），总长约12kb。从3到5端依次排列着先导序列、编码N、P/M1、M2、G、L蛋白的5个结构基因以及非编码区，各个基因间存在非编码的间隔序列。这5种结构蛋白各自承担着重要功能：N蛋白是具有保护病毒RNA功能的核蛋白；P/M1、M2蛋白分别构成病毒衣壳和包膜；L蛋白为RNA依赖的RNA聚合酶；G蛋白则构成病毒包膜的糖蛋白刺突，决定着病毒的感染性、血凝性和毒力等关键特性。

狂犬病病毒的基因组为不分节段的单负链RNA（-ssRNA），总长约12kb。从3到5端依次排列着先导序列、编码N、P/M1、M2、G、L蛋白的5个结构基因以及非编码区，各个基因间存在非编码的间隔序列。这5种结构蛋白各自承担着重要功能：N蛋白是具有保护病毒RNA功能的核蛋白；P/M1、M2蛋白分别构成病毒衣壳和包膜；L蛋白为RNA依赖的RNA聚合酶；G蛋白则构成病毒包膜的糖蛋白刺突，决定着病毒的感染性、血凝性和毒力等关键特性。

在分类方面，依据McAb技术，可将狂犬病病毒及相关病毒分为6个血清型。其中血清1型是经典狂犬病病毒，主要包含野毒株和疫苗毒株，以及新鉴定的中欧啮齿动物分离株；其余五型为狂犬病相关病毒，分别是血清2型（标准拉各斯蝙蝠病毒，Lagos-batvirus）、血清3型（莫克拉病毒，Mokolavirus）、血清4型（杜文海洛病毒，Duvenhagevirus）、血清5型（Obodhiang病毒原型株）和血清6型（Kotonkan病毒原型株）。另外，按照狂犬病病毒的N基因核苷酸序列的差异，又可分为7个基因型。其中基因1-4型与血清型1-4相对应，基因5型为欧洲蝙蝠狂犬病病毒1（EBL1病毒株），基因6型为欧洲蝙蝠狂犬病病毒2（EBL2病毒株），基因7型为澳大利亚蝙蝠狂犬病病毒（ABL病毒株）。对狂犬病病毒结构与分类的深入认知，为后续探究病毒的致病机制、传播规律以及研发针对性的防治措施奠定了坚实基础。

1.1.2G蛋白的关键作用

G蛋白作为狂犬病病毒包膜的主要成分，由513个氨基酸组成，在病毒的生命活动和免疫过程中发挥着不可或缺的关键作用。根据氨基酸序列和功能，G蛋白可细分为三个结构域：N端结构域、跨膜结构域和C端结构域，其中N端结构域具有免疫原性，是疫苗设计和诊断试剂研发的重要靶点。

在病毒感染过程中，G蛋白起着至关重要的介导作用。病毒包膜表面的G蛋白能够与神经细胞表面的乙酰胆碱受体（acetylcholinereceptor，AChR）特异结合，这种特异性结合是病毒吸附并侵入宿主细胞的关键起始步骤。结合之后，病毒吸附部位的细胞膜会发生内陷，进而包裹病毒穿入细胞，随后通过膜融合以及脱衣壳的过程，将病毒核酸成功释放至细胞质中，为后续的病毒复制过程开启大门。可以说，G蛋白与受体的结合能力直接影响着病毒的感染效率和宿主范围。

从免疫原性角度来看，G蛋白是诱导机体产生免疫反应的主要抗原，能够刺激机体产生病毒中和抗体（virus-neutralizingantibodies，VNA）。这些中和抗体可以特异性地识别并结合G蛋白，从而阻断病毒与宿主细胞受体的结合，有效中和病毒的活性，阻止病毒感染宿主细胞，对机体起到重要的免疫保护作用。此外，G蛋白还能够诱导机体产生细胞免疫应答，T辅助细胞对抗体诱导是必需的，免疫接种可诱导产生直接针对核蛋白（N）的溶细胞性T细胞，此类T细胞可能在病毒进入中枢神经系统（CNS）之前摧毁受感染的非神经细胞，进一步增强机体的免疫防御能力。

G蛋白同时含有毒力决定簇，在位点333的精氨酸对病毒毒力具有重要作用，它与神经侵袭力和跨突触传播能力相关，能使病毒在神经系统中扩散的速度更快。尽管狂犬病病毒的致病性是由多个基因共同决定的，但G蛋白在其中的关键作用不可忽视。对G蛋