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猪传染性胸膜肺炎放线杆菌外膜蛋白：克隆表达、免疫原性及应用前景探究

一、引言

1.1研究背景与意义

猪传染性胸膜肺炎（Porcinecontagiouspleuropneumonia）是由胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacilluspleuropneumoniae，APP）引起的一种高度接触传染性、致死性呼吸道疾病，是国际上公认的危害现代养猪业的重大疫病之一。APP属于巴氏杆菌科、放线杆菌属，为革兰氏阴性球杆菌，有荚膜和纤毛，无芽孢。根据其脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）和荚膜多糖（CapsulePolysacharides，CPS）的差异，目前已鉴定出18种血清型，各血清型间的抗原性和致病性存在差异，部分血清型之间缺乏交叉保护力，这也使得猪传染性胸膜肺炎的防控难度加大。

该病可感染各种年龄阶段的猪，但对3月至6月龄的幼猪危害尤为严重，常被称为“中大猪杀手”。其传播途径主要是通过病猪和带菌猪，经由呼吸道气流传播。在气候多变的寒冷季节，即10月至次年2月，发病率会显著上升。急性暴发时，发病率和死亡率可达50%左右，最急性型病例的死亡率更是高达80%-100%。患病猪常表现出体温升高、精神萎靡、食欲减退、呼吸困难、咳嗽等症状，严重影响猪的生长发育和养殖效益。

猪传染性胸膜肺炎不仅会导致猪只的直接死亡，还会使患病猪生长迟缓，饲料转化率降低。据相关研究表明，慢性型病例会导致猪群日增重减少约33.6%。同时，由于患病猪的抵抗力下降，还容易继发其他疾病，进一步增加了养猪业的经济损失。近年来，随着养猪业规模化、集约化程度的不断提高，猪传染性胸膜肺炎的危害愈发凸显，给全球养猪业带来了巨大的经济负担。

在当前养猪业中，抗生素曾被广泛用于猪传染性胸膜肺炎的防治。然而，随着细菌耐药性问题的日益严重，许多抗生素的治疗效果大打折扣。例如，早期使用的林可霉素等传统药物，对APP的治疗效果已明显下降。而新研发的抗生素，虽然在一定程度上仍有效果，但长期使用也面临着耐药性产生的风险。因此，开发新的防控手段迫在眉睫。

疫苗免疫被认为是预防猪传染性胸膜肺炎最有效的途径之一。外膜蛋白（Outermembraneprotein，OMP）作为APP的重要组成部分，在细菌与宿主的相互作用中发挥着关键作用，是潜在的疫苗候选抗原。OMP具有良好的免疫原性，能够刺激机体产生免疫应答，从而为猪只提供保护。对APP外膜蛋白进行克隆表达和免疫原性分析，有助于深入了解其免疫保护机制，为开发高效、安全的新型疫苗奠定基础。

此外，准确、快速的诊断方法对于猪传染性胸膜肺炎的防控也至关重要。通过对APP外膜蛋白的研究，可以建立基于外膜蛋白的特异性诊断方法，如酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫荧光试验等，实现对该病的早期诊断和精准防控，降低疾病的传播风险，减少经济损失。综上所述，开展猪传染性胸膜肺炎放线杆菌外膜蛋白的克隆表达及其免疫原性分析具有重要的理论意义和实际应用价值，有望为猪传染性胸膜肺炎的防控提供新的策略和方法。

1.2猪传染性胸膜肺炎放线杆菌概述

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacilluspleuropneumoniae，APP），隶属于巴氏杆菌科、放线杆菌属，是一种革兰氏阴性球杆菌，具有荚膜和纤毛，无芽孢。该菌严格需氧，生长时对营养要求苛刻，通常需要添加烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（Nicotinamideadeninedinucleotide，NAD）等生长因子，在巧克力琼脂培养基或含NAD的TSA培养基上，37℃培养24-48小时后，可形成圆形、湿润、灰白色、边缘整齐的小菌落。

目前，根据APP的脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）和荚膜多糖（CapsulePolysacharides，CPS）的抗原性差异，已鉴定出18种血清型，不同血清型的毒力和流行情况有所不同。在我国，流行较多的血清型主要为1型、2型、5型及7型。其中，血清1型的毒力较强，感染后常导致猪只出现严重的临床症状和较高的死亡率；血清2型的流行范围较广，在部分地区呈地方性流行；血清5型和7型也时有发生，给养猪业带来了一定的经济损失。

APP主要通过呼吸道传播，病猪和带菌猪是主要的传染源。当健康猪吸入含有病原体的空气飞沫或与感染猪直接接触时，极易感染发病。尤其是在气候多变的寒冷季节，如10月至次年2月，猪群的抵抗力下降，加上猪舍通风不良、饲养密度过大等因素，更有利于APP的传播和感染，导致发病率显著上升。

APP的致病机制较为复杂，其毒力因子在致病过程中发挥着关键作用。溶血素（Apx毒素）是APP最重要的毒力因