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碳纳米管基质辅助聚丙烯酰胺凝胶电泳对人血清蛋白质的高效分离与分析

一、引言

1.1研究背景与意义

人血清是一种极为复杂的生物流体，包含了成千上万种蛋白质，其含量和组成的变化与人体的生理和病理状态密切相关。血清蛋白质组学研究旨在全面分析血清中的蛋白质，对于疾病的早期诊断、发病机制的探究以及治疗靶点的确定等具有重要意义。例如，在癌症研究中，通过检测血清中某些特定蛋白质的含量变化，可以实现癌症的早期筛查和诊断，为患者争取宝贵的治疗时间；在神经系统疾病研究中，血清蛋白质组学有助于揭示疾病的发病机制，为开发新的治疗方法提供理论依据。然而，由于血清蛋白质的复杂性和动态范围广，其中高丰度蛋白质如白蛋白和免疫球蛋白等占据了主导地位，掩盖了低丰度蛋白质的信号，使得低丰度蛋白质的检测和分析成为一大挑战。低丰度蛋白质往往与疾病的发生发展密切相关，可能作为潜在的生物标志物，因此如何有效地分离和分析血清中的蛋白质，尤其是低丰度蛋白质，是当前生物医学领域的研究热点之一。

聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）是一种常用的蛋白质分离技术，以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和交联剂甲叉双丙烯酰胺在引发剂和加速剂的作用下聚合交联而成，形成具有网状结构的凝胶。这种凝胶具有分子筛效应，能够根据蛋白质的分子量大小、形状及其所带的电荷量等因素，将蛋白质在电场中进行分离。在蛋白质的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳中，蛋白质能够保持完整状态，依据蛋白质的多种特性逐渐呈梯度分开；在变性聚丙烯酰胺凝胶电泳中，加入变性剂（如蛋白质变性剂SDS）后，蛋白质亚基的电泳迁移率主要取决于亚基分子量的大小。PAGE具有分辨力强、操作简便、时间短、化学性质稳定、机械性能好等优点，在蛋白质分离分析中得到了广泛应用。例如，在蛋白质纯度检测中，PAGE可以清晰地显示蛋白质的条带，判断蛋白质的纯度；在蛋白质分子量测定中，通过与标准分子量蛋白质对比，可以准确测定未知蛋白质的分子量。然而，传统的PAGE技术在分离复杂的人血清蛋白质时，仍存在一些局限性，如分辨率有限，难以将一些分子量相近或结构相似的蛋白质有效分离；对低丰度蛋白质的检测灵敏度较低，容易遗漏一些重要的生物标志物。

碳纳米管（CNTs）是由单层或多层石墨片层卷曲而成的无缝圆筒结构，根据层数不同可分为单壁碳纳米管和多壁碳纳米管。碳纳米管具有许多独特的物理和化学性质，如极高的强度和硬度，其抗拉强度是钢的100倍，而密度只有钢的1/6；良好的电学和热学性能，电导率和热导率均远高于铜；大长径比，长径比可以达到10^7以上；表面具有丰富的活性基团，可以进行各种化学修饰和改性，且在大多数环境中表现出良好的化学稳定性。近年来，碳纳米管在生物医学领域展现出了巨大的应用潜力。在药物递送方面，碳纳米管可以被设计和修饰以满足特定的药物递送要求，如药物负载量、靶向性和释放机制等，能够提高药物在肿瘤部位的浓度，减少药物对正常组织的毒副作用，从而提高肿瘤治疗效果；在生物传感器方面，碳纳米管的理化性质使其能够快速灵敏地检测生物分子或病原体，并提供可视化或电化学信号输出，可用于早期检测和监测疾病。在蛋白质分离领域，碳纳米管的高比表面积和独特的表面性质使其有望作为基质辅助材料，提高蛋白质的分离效果。研究表明，碳纳米管可以与蛋白质发生相互作用，通过非共价相互作用与蛋白质结合形成蛋白质冠，这种相互作用可能会影响蛋白质在凝胶电泳中的迁移行为，从而实现更高效的分离。将碳纳米管引入聚丙烯酰胺凝胶电泳中，作为基质辅助材料，有可能克服传统PAGE技术的一些局限性，提高人血清蛋白质的分离分辨率和对低丰度蛋白质的检测灵敏度，为血清蛋白质组学研究提供更强大的技术手段，具有重要的研究意义和应用价值。

1.2国内外研究现状

传统的聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）技术在人血清蛋白质分离分析方面有着广泛的应用历史和大量的研究成果。早期的研究主要集中在利用PAGE技术对人血清中的蛋白质进行初步分离和鉴定，通过优化电泳条件，如凝胶浓度、缓冲液体系、电泳时间和电压等，来提高蛋白质的分离效果。例如，经典的二维聚丙烯酰胺凝胶电泳（2D-PAGE）技术，将等电聚焦电泳和SDS-PAGE相结合，能够分离出数百种甚至上千种蛋白质，在血清蛋白质组学研究的初期发挥了重要作用，使研究人员能够初步了解血清蛋白质的组成和分布情况。通过2D-PAGE技术，研究人员成功地鉴定出了一些与疾病相关的蛋白质，为疾病的诊断和治疗提供了潜在的生物标志物。

然而，随着研究的深入，传统PAGE技术的局限性逐渐显现。其分辨率有限，对于一些分子量相近、等电点相似的蛋白质，难以实现有效的分离，导致一些蛋白质条带重叠，影响了对蛋白质的准确鉴定和分析。而且传统PAGE对低丰度蛋白