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RNA干扰HER-2基因对大肠癌HT-29细胞影响的多维度探究

一、引言

1.1研究背景与意义

大肠癌，作为全球范围内严重威胁人类健康的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率一直居高不下，给患者及其家庭带来了沉重的负担，也对社会医疗资源造成了巨大的压力。据世界卫生组织国际癌症研究机构（IARC）发布的2020年全球癌症负担数据显示，结直肠癌新发病例达193万，死亡病例93.5万，发病率位居所有恶性肿瘤第3位，死亡率位居第2位。在中国，随着经济的快速发展、居民生活方式和饮食结构的改变，大肠癌的发病率也呈现出逐年上升的趋势，且发病年龄逐渐年轻化。上海市疾病预防控制中心的数据表明，2019年上海市大肠癌发病率为42.35/10万，中标率为23.75/10万，在男性和女性恶性肿瘤发病率中分别位居第3位和第2位。

大肠癌的发生发展是一个涉及多基因、多步骤、多阶段的复杂生物学过程，其中多种基因的异常表达在大肠癌的发生、发展、转移和预后中发挥着关键作用。人表皮生长因子受体2（HER-2）基因，作为一种重要的原癌基因，编码的HER-2蛋白是一种跨膜酪氨酸激酶受体，属于表皮生长因子受体家族成员。正常生理状态下，HER-2基因的表达受到严格调控，其编码的HER-2蛋白参与细胞的生长、增殖、分化、迁移和凋亡等多种重要生理过程，维持细胞的正常功能和内环境稳定。然而，在多种恶性肿瘤中，HER-2基因常常发生扩增和过表达，导致HER-2蛋白的异常高表达，从而激活下游一系列与细胞增殖、生存、侵袭和转移相关的信号通路，如RAS/RAF/MEK/ERK、PI3K/AKT/mTOR等信号通路，促进肿瘤细胞的增殖、存活、迁移和侵袭，抑制肿瘤细胞的凋亡，增强肿瘤细胞的耐药性，进而影响肿瘤的发生发展和预后。

研究表明，HER-2基因在大肠癌中的表达情况与大肠癌的临床病理特征和预后密切相关。HER-2基因过表达的大肠癌患者往往具有更高的肿瘤分期、更差的组织学分级、更高的淋巴结转移率和远处转移率，以及更短的无病生存期和总生存期。此外，HER-2基因过表达还与大肠癌患者对化疗和靶向治疗的耐药性密切相关，导致患者的治疗效果不佳，预后不良。因此，深入研究HER-2基因在大肠癌发生发展中的作用机制，寻找有效的干预措施，对于提高大肠癌的诊断、治疗水平和改善患者的预后具有重要的理论和临床意义。

RNA干扰（RNAinterference，RNAi）技术，作为一种新兴的基因沉默技术，具有高度的特异性、高效性和可操作性等优点，为肿瘤的基因治疗提供了新的策略和方法。RNAi技术的基本原理是通过导入外源双链RNA（double-strandedRNA，dsRNA），在细胞内被核酸酶切割成小干扰RNA（smallinterferingRNA，siRNA），siRNA与体内一些酶和蛋白质形成RNA诱导沉默复合体（RNA-inducedsilencingcomplex，RISC），RISC中的siRNA通过碱基互补配对原则识别并结合靶mRNA，在核酸酶的作用下将靶mRNA降解，从而实现对靶基因表达的特异性抑制，达到基因沉默的目的。在肿瘤研究领域，RNAi技术已被广泛应用于肿瘤相关基因的功能研究和肿瘤治疗靶点的筛选。通过RNAi技术沉默肿瘤相关基因的表达，可以有效地抑制肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭，诱导肿瘤细胞的凋亡，增强肿瘤细胞对化疗和放疗的敏感性，为肿瘤的治疗提供了新的思路和方法。

基于以上背景，本研究旨在探讨RNA干扰HER-2基因对大肠癌HT-29细胞的影响，通过构建靶向HER-2基因的RNA干扰载体，转染大肠癌HT-29细胞，观察HER-2基因表达的变化以及对细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭等生物学行为的影响，并初步探讨其作用机制。本研究的开展不仅有助于深入了解HER-2基因在大肠癌发生发展中的作用机制，为大肠癌的基因治疗提供新的理论依据和实验基础，也为开发针对HER-2基因的新型靶向治疗药物和方法提供了新的思路和方向，具有重要的理论和临床应用价值。

1.2国内外研究现状

在HER-2基因的研究领域，国内外学者已取得了丰硕的成果。国外方面，早在1987年，SlamonDJ等学者就发现HER-2基因在乳腺癌中存在扩增和过表达的现象，且与乳腺癌的预后密切相关。此后，针对HER-2基因在多种恶性肿瘤中的作用机制展开了深入研究。在大肠癌研究中，国外研究表明HER-2基因过表达在大肠癌患者中约占10%-35%，且与肿瘤的侵袭性、淋巴结转移及不良预后显著相关。例如，一项纳入了500例大肠癌患者的多中心研究显示，HER-2