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let--7c-1对PTZ致痫大鼠学习记忆功能的影响

摘要

本研究旨在探讨let--7c-1对戊四氮（PTZ）致痫大鼠学习记忆功能的影响。通过构建PTZ致痫大鼠模型，将大鼠随机分为正常对照组、PTZ致痫模型组、let--7c-1过表达组和阴性对照组，运用Morris水迷宫实验、Y迷宫实验等行为学方法评估大鼠学习记忆能力，结合实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和Westernblot技术检测相关基因和蛋白的表达水平。结果表明，let--7c-1过表达能够显著改善PTZ致痫大鼠的学习记忆功能，其机制可能与调节神经炎症反应、抑制神经元凋亡以及影响突触可塑性相关信号通路有关。本研究为癫痫相关认知障碍的治疗提供了新的潜在靶点和理论依据。

关键词

let--7c-1；PTZ致痫大鼠；学习记忆功能；神经炎症；突触可塑性

一、引言

癫痫是一种常见的神经系统慢性疾病，全球约有6500万患者，我国癫痫患者人数超过1000万。癫痫发作不仅会导致患者出现抽搐、意识丧失等急性症状，还常伴有认知功能障碍，严重影响患者的生活质量[1]。学习记忆功能受损是癫痫患者常见的认知障碍表现之一，其发病机制复杂，涉及神经炎症、氧化应激、神经元凋亡、突触可塑性改变等多个方面[2]。

微小RNA（miRNA）是一类长度约为22个核苷酸的非编码RNA，通过与靶mRNA的互补配对，在转录后水平调控基因表达，参与细胞增殖、分化、凋亡、代谢等多种生物学过程[3]。近年来研究发现，miRNA在神经系统发育、神经退行性疾病以及癫痫的发生发展过程中发挥着重要作用[4]。let--7c-1作为let--7家族的重要成员，已有研究表明其在肿瘤发生、细胞增殖等方面具有调控作用，但在癫痫相关认知障碍中的作用尚未明确[5]。

戊四氮（PTZ）是一种常用的致痫剂，通过作用于γ-氨基丁酸（GABA）能神经系统，降低神经元的抑制性，诱导癫痫发作。PTZ致痫大鼠模型在癫痫发病机制研究和药物研发中广泛应用[6]。本研究通过构建PTZ致痫大鼠模型，探讨let--7c-1对PTZ致痫大鼠学习记忆功能的影响及其潜在机制，为癫痫相关认知障碍的治疗提供新的思路和靶点。

二、材料与方法

（一）实验动物

选取健康雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠60只，6-8周龄，体重200-220g，购自[具体实验动物中心名称]。大鼠饲养于温度（22±2）℃、湿度50%-60%、12h昼夜交替的环境中，自由进食和饮水。适应性饲养7天后，进行后续实验。

（二）主要试剂与仪器

试剂：戊四氮（PTZ，Sigma公司）、let--7c-1mimics、阴性对照mimics（上海吉玛公司）、Trizol试剂（Invitrogen公司）、逆转录试剂盒（TaKaRa公司）、SYBRGreenPCRMasterMix（Roche公司）、兔抗大鼠Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase-3、脑源性神经营养因子（BDNF）、突触素（Synapsin）、微管相关蛋白2（MAP2）抗体（CellSignalingTechnology公司）、羊抗兔IgG-HRP（JacksonImmunoResearch公司）。

仪器：Morris水迷宫（上海欣软信息科技有限公司）、Y迷宫（上海欣软信息科技有限公司）、实时荧光定量PCR仪（RocheLightCycler480）、蛋白质电泳系统（Bio-Rad公司）、Westernblot转膜仪（Bio-Rad公司）、酶标仪（ThermoFisherScientific公司）。

（三）实验分组与处理

将60只SD大鼠随机分为4组，每组15只：正常对照组、PTZ致痫模型组、let--7c-1过表达组和阴性对照组。

PTZ致痫模型构建：PTZ致痫模型组、let--7c-1过表达组和阴性对照组大鼠均采用腹腔注射PTZ（35mg/kg）的方法构建癫痫模型，每天注射1次，连续注射7天。正常对照组大鼠腹腔注射等体积的生理盐水。

let--7c-1过表达处理：在第3次注射PTZ前1天，let--7c-1过表达组大鼠侧脑室注射let--7c-1mimics（5μL，100nmol/L），阴性对照组大鼠侧脑室注射等体积的阴性对照mimics。侧脑室注射方法：大鼠用10%水合氯醛（3.5mL/kg）腹腔注射麻醉后，固定于脑立体定位仪上，根据大鼠脑立体定位图谱，以前囟为原点，在其前1.0mm、旁开1.5mm、深3.5mm处，用微量注射器缓慢注入相应试剂，注射速度为