Serpin调控昆虫免疫反应及提升球孢白僵菌毒力的机制与应用.docxVIP

Serpin调控昆虫免疫反应及提升球孢白僵菌毒力的机制与应用

一、引言

1.1研究背景与意义

在害虫防治领域，生物防治因其环保、可持续等优势，逐渐成为研究与应用的热点。球孢白僵菌（Beauveriabassiana）作为一种极具潜力的生物防治剂，在害虫治理中发挥着重要作用。它属于子囊菌类的虫生真菌，能产生分生孢子，这些孢子可随气流、水流扩散，当与昆虫接触时，便会附着在昆虫体表。在适宜的温湿度条件下，孢子吸水膨胀萌发，生出芽管，借助水解酶、代谢酶和菌丝的机械压力穿透寄主体壁，进入血腔大量繁殖，分泌毒素和代谢产物，扰乱昆虫生理代谢，最终导致昆虫死亡。

球孢白僵菌具有广泛的寄主范围，能侵染15个目149个科的700多种昆虫及蜱螨类，对二斑叶螨、烟粉虱、蓟马、亚洲玉米螟等多种农林害虫都有防治效果。同时，它对天敌昆虫如瓢虫、食蚜虻和草蛉等侵染攻击能力较弱，有利于保护生态群落中的有益生物。目前，全球以球孢白僵菌为有效成分的制剂占全部真菌杀虫剂的33.9%，我国已登记的11种真菌杀虫剂中有6种为球孢白僵菌产品。

然而，球孢白僵菌在实际应用中仍存在一些局限性。一方面，其击倒害虫的时间较长，不能快速有效地控制害虫种群数量；另一方面，防治效果易受环境因素的影响，如温度、湿度、光照等，在不适宜的环境条件下，其杀虫活性会显著降低。这些问题限制了球孢白僵菌的大规模应用和推广。

昆虫在长期的进化过程中形成了复杂而高效的免疫系统，以抵御外界病原体的入侵。黑化反应是昆虫重要的天然免疫机制之一，由丝氨酸蛋白酶级联反应介导对酚氧化酶原的剪切，从而启动黑化过程，对入侵的病原体进行包被和杀灭。而丝氨酸蛋白酶抑制剂serpin作为昆虫免疫的负调控因子，在这个过程中发挥着关键作用。serpin能够与丝氨酸蛋白酶结合，形成共价复合物，抑制丝氨酸蛋白酶的活性，从而阻断黑化反应通路的激活。研究表明，在家蚕中，serpin-1a和serpin-6通过与丝氨酸蛋白酶CLIP2形成共价复合物，协同调节Toll通路免疫稳态；在棉铃虫中，serpin-9和serpin-5分别靶向丝氨酸蛋白酶cSP4和cSP6，阻断黑化反应通路，促进棉铃虫病毒的感染。

基于serpin对昆虫免疫的负调控作用，将其与球孢白僵菌相结合，有可能为提高球孢白僵菌的毒力提供新的途径。通过基因工程等手段，使球孢白僵菌表达serpin，或在使用球孢白僵菌时添加serpin相关制剂，可能会抑制昆虫的免疫反应，增强球孢白僵菌对昆虫的侵染能力，从而缩短击倒害虫的时间，提高防治效果，降低环境因素对其防治效果的影响。这对于推动球孢白僵菌在生物防治中的广泛应用，实现害虫的可持续控制具有重要的理论和实践意义。

1.2国内外研究现状

1.2.1Serpin在昆虫免疫中的研究

Serpin作为昆虫免疫的关键负调控因子，在昆虫免疫反应中发挥着重要作用，一直是国内外研究的热点。早期研究主要聚焦于serpin的结构与功能，随着分子生物学技术的不断发展，对其作用机制的研究逐渐深入。

在结构方面，serpin属于丝氨酸蛋白酶抑制剂超家族，具有保守的结构特征。其活性中心含有一个高度保守的反应中心环（RCL），这一结构特征使得serpin能够与丝氨酸蛋白酶特异性结合。这种特异性结合是serpin发挥免疫调控作用的基础，不同昆虫中的serpin虽然在氨基酸序列上存在一定差异，但RCL区域的保守性保证了其与丝氨酸蛋白酶相互作用的特异性。

在功能研究中，黑化反应是昆虫免疫研究的重点领域。黑化反应由丝氨酸蛋白酶级联反应介导对酚氧化酶原的剪切，从而启动黑化过程，对入侵的病原体进行包被和杀灭。而serpin能够与丝氨酸蛋白酶结合，形成共价复合物，抑制丝氨酸蛋白酶的活性，从而阻断黑化反应通路的激活。在家蚕中，serpin-1a和serpin-6通过与丝氨酸蛋白酶CLIP2形成共价复合物，协同调节Toll通路免疫稳态。当家蚕受到病原体侵染时，Toll通路被激活，丝氨酸蛋白酶CLIP2参与激活过程，促进抗菌肽基因的表达和血淋巴的抗菌活性。而serpin-1a和serpin-6能够与CLIP2结合，抑制其活性，避免Toll通路过度激活，维持免疫稳态。在棉铃虫中，serpin-9和serpin-5分别靶向丝氨酸蛋白酶cSP4和cSP6，阻断黑化反应通路，促进棉铃虫病毒的感染。棉铃虫病毒感染时，上调serpin-9和serpin-5的表达，它们与相应的丝氨酸蛋白酶结合，抑制黑化反应，使病毒能够克服宿主的免疫系统，建立系统感染。

除了黑化反应，ser