蛋白质的一级结构.pptVIP

对某一种蛋白质来说，在某一pH时，它所带的正电荷与负电荷恰好相等，即净电荷为零，这一pH称蛋白质的等电点。pH＞pI时，蛋白质带净负电荷，电场中移向正极pH＜pI时，蛋白质带净正电荷，电场中移向负极pH=pI时，蛋白质不带静电荷，电场中不移动。2.8.8利用蛋白质的带电性可对蛋白质进行电泳分离非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳蛋白质在(PAGE)介质中电泳时，其迁移率第30页，共53页，星期日，2025年，2月5日聚丙烯酰胺凝胶系统中加入SDS和少量巯基乙醇SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法：则电泳迁移率主要取决于其相对分子质量(q/r），而与电荷和分子形状无关。第31页，共53页，星期日，2025年，2月5日①SDS为阴离子，多肽链覆盖上相同密度的负电荷超过蛋白质原有的电荷量，因而掩盖了不同种类蛋白质间原有的电荷差别。因此，所有SDS-蛋白质复合物，电泳时均以同样的电荷/分子质量比向正极移动。②改变了蛋白质单体分子的构象。SDS-蛋白质在水溶液中长椭圆棒，短轴直径均为1.8nm,长轴长度则随蛋白质的分子量而成正比例地变化。③可用来测量蛋白质的分子量第32页，共53页，星期日，2025年，2月5日区带电泳：外加电场时，蛋白质混合物在具有pH梯度的介质中移向并聚焦（停留）在等于其等电点的pH处，形成区带。第33页，共53页，星期日，2025年，2月5日测定蛋白质含量的常用方法：凯氏定氮法：紫外吸收法双缩脲法：Folin-酚试剂法（Lowry法）：考马斯亮蓝法（现最常用的方法）：胶体金法：带负电的疏水胶体，洋红色，遇蛋白质变蓝色，灵敏度最高第34页，共53页，星期日，2025年，2月5日蛋白质具有多个结构层次：一级结构——二级结构、三级结构、四级结构——生物功能蛋白质的一级结构指多肽链中氨基酸的排列顺序——也称共价结构。共价肽键是一级结构的唯一连接方式多肽链一级结构决定着蛋白质的高级结构和功能2.9蛋白质一级结构的测定——即蛋白质多肽链中氨基酸序列的测定高级结构第35页，共53页，星期日，2025年，2月5日测定蛋白质分子中多肽链的数目；拆分蛋白质分子中的多肽链；测定多肽链的氨基酸组成；分析多肽链的N末端和C末端（方法很多）断裂多肽链内的二硫键；多肽链断裂成肽段；测定各个多肽段的氨基酸顺序；确定肽段在多肽链中的次序；确定原多肽链中二硫键的位置。蛋白质一级结构测定策略第36页，共53页，星期日，2025年，2月5日测得相对分子质量Mr很多方法可用于确定蛋白质的相对分子量，如：渗透压、扩散系数、沉降系数凝胶过滤、凝胶电泳等，测定末端氨基酸数xX÷(m/Mr)=n(蛋白质分子中肽链数目)（m为样品质量）变性：8mol/L尿素或6mol/LHCI，或高浓度盐溶液如有二硫键交联：巯基乙醇，或过氧乙酸处理凝胶过滤或电泳分离不同肽链蛋白质中多肽链的拆分蛋白质中多肽链数目的确定第37页，共53页，星期日，2025年，2月5日多肽链的拆分第38页，共53页，星期日，2025年，2月5日XiongYanfei*MultimediaPresentationofBiochemistry蛋白质的一级结构第1页，共53页，星期日，2025年，2月5日这种缩合作用可反复进行，形成二肽、三肽、寡肽及多肽；肽链中一个氨基酸单位称为一个氨基酸残基(residue)，一个氨基酸残基较游离氨基酸少一个水分子（末端除外）,平均分子量110；肽链的大小可用所含氨基酸残基的总数表示或相对分子质量表示，大多数天然多肽含50~200个氨基酸残基，相对分子质量在5,500~220,00之间；第2页，共53页，星期日，2025年，2月5日2.6.2肽链是有方向性的(directional)肽链的一端有游离氨基，称氨基末端（或N末端N-terminal），另一端有游离羧基，称羧基末端（或C末端C-terminal)；肽链写法：游离α-氨基在左，游离α-羧基在右，氨基酸之间用“—”表示肽键。如：H2N－丝氨酰－亮氨酰－苯丙氨酸-COOH写为：Ser-Leu-Phe（或S-L-F）前述五肽：丝氨酰-甘氨酰-酪氨酰-丙氨酰-亮氨酸写为：Ser-Gly-Tyr-Ala-Leu（或S-G-Y-A-L）H2N--COOH第3页，共53页，星期日，2025年，2月5日肽键缩合第4页，共53页，星期日，2025