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液质联用技术（LC-MS）培训课件

第一章：液质联用技术概述

什么是液质联用技术（LC-MS）？液质联用技术是将液相色谱（LC）与质谱（MS）两种强大的分析工具结合在一起的综合分析方法。这种联用技术充分利用了：液相色谱的高效分离能力质谱的精确分子识别能力高灵敏度的痕量分析特性通过这种组合，LC-MS能够在复杂样品中实现组分的有效分离，并对各组分进行精确的定性和定量分析。主要应用领域药物代谢与药代动力学研究环境污染物与有毒物质检测食品安全与质量控制蛋白质组学与生物标志物研究

LC-MS的发展历程与技术革新120世纪70年代液质联用技术起步，面临接口技术挑战。早期主要用于特定化合物研究，应用范围有限。220世纪90年代电喷雾离子化（ESI）和大气压化学电离（APCI）技术突破，解决了接口问题，拓展了应用领域。32000年代飞行时间质谱（TOF）和串联质谱（MS/MS）技术普及，提高了分析的灵敏度和选择性。42010年至今高分辨率质谱（HRMS）和超高效液相色谱（UPLC）技术快速发展，实现了更高效、更精准的分析。

典型液质联用仪器结构示意图液相色谱系统包括输液泵、自动进样器、色谱柱和柱温箱，负责样品的分离。离子源如ESI、APCI等，将液相流出物转化为气相离子。质谱分析器四极杆、TOF等，根据质荷比分离离子。检测器与数据系统

第二章：液相色谱基础

液相色谱的基本原理液相色谱是基于样品组分在固定相和流动相之间分配系数差异而实现分离的技术。当样品通过色谱柱时，不同组分因与固定相的相互作用强弱不同，导致流出时间（保留时间）不同，从而实现分离。分离的基本机理包括：吸附作用分配作用离子交换作用尺寸排阻作用亲和作用常用色谱柱类型反相柱（C18、C8）：适用于大多数非极性至中等极性化合物正相柱（硅胶）：适用于极性化合物分析离子交换柱：适用于带电荷的化合物亲水作用色谱柱（HILIC）：适用于高极性化合物

流动相与梯度洗脱常用流动相组成水相：纯水、缓冲液（醋酸铵、甲酸铵）有机相：甲醇、乙腈、四氢呋喃添加剂：甲酸、乙酸（提高离子化效率）pH值影响流动相pH值会影响分析物的电离状态，进而影响其保留行为和MS检测灵敏度。对于酸碱性化合物，适当调整pH可显著改善分离效果。梯度洗脱优势提高分离效率，特别是对于复杂样品缩短分析时间，提高工作效率改善峰形，提高检测灵敏度

样品制备与进样技术样品采集确保样品代表性、防止污染和降解。生物样品应立即冷藏或添加防腐剂。样品前处理包括过滤、离心、稀释、蛋白沉淀等基础处理，去除不溶物和干扰物。样品富集提纯利用固相萃取（SPE）、液液萃取（LLE）等技术提高目标物浓度，降低基质效应。样品进样自动进样器提供精确体积控制和高重复性，推荐用于常规分析。手动进样适用于特殊样品或小批量实验。

第三章：质谱基础质谱是LC-MS系统的核心检测单元，能够提供化合物的分子量和结构信息。本章将介绍质谱的基本原理、常用离子源和质量分析器类型，以及质谱数据的解读方法。

质谱的工作原理离子化技术电喷雾离子化（ESI）适用于极性、热不稳定化合物多电荷形成，适合大分子分析可产生[M+H]+或[M-H]-离子大气压化学电离（APCI）适用于中低极性、热稳定化合物主要形成单电荷离子对某些ESI难电离化合物效果好质量分析器类型四极杆（Quadrupole）结构简单，扫描速度快，价格适中，分辨率中等，广泛用于常规分析。飞行时间（TOF）高分辨率，全质量范围扫描，适合精确质量分析和未知物鉴定。离子阱（IonTrap）可实现MSn多级质谱，结构紧凑，适合结构解析。轨道阱（Orbitrap）超高分辨率，高质量精度，适合复杂样品分析和蛋白质组学研究。

离子检测与信号处理离子检测器类型电子倍增管（EM）：最常用的离子检测器，通过二次电子发射放大信号光电倍增管：将离子信号转换为光信号后再放大微通道板（MCP）：高灵敏度，快速响应，适用于TOF质谱仪法拉第杯：直接测量离子电荷，用于精确定量信号处理与质谱图生成离子信号→电信号→数字信号→数据处理→质谱图现代质谱数据处理软件可实现：背景扣除与噪声过滤峰检测与积分质谱解卷积（deconvolution）同位素分布分析

第四章：液质联用仪器操作流程本章将详细介绍LC-MS仪器的标准操作流程，包括开机预热、方法设定、样品分析、数据采集等环节。掌握正确的操作程序对于获得可靠的分析结果至关重要。

仪器开机与预热确认电源与气源检查仪器电源连接，确保氮气、氩气等气源充足且压力正常。通常氮气压力应维持在60-80psi，氩气压力约15-20psi。启动计算机与软件先开启数据工作站，登录系统，启动仪器控制软件。确认网络连接正常，数据存储空间充足。启动液相系统检查流动相储备，开启液相系统，设置初始流速（通常0.2-0.4mL/min），冲洗管