核酸等温扩增-杨银辉.pptxVIP

核酸等温扩增技术在病毒检测中的应用军事医学科学院微生物流行病研究所杨银辉

环引物在茎环结构环状结构处识别并不断延伸，使双链过早打开，有利于复杂茎环结构的成环和外引物置换作用。这一定程度上加速了整个LAMP扩增循环阶段的反应。

LAMP技术小结

存在缺陷所识别的靶位序列长度不得过大，一般在300bp以内。因此，无法进行长片段DNA的扩增；01LAMP技术具备高灵敏度，对操作要求严格分区，否则极易受到污染而产生假阳性结果；02LAMP的反应结果只有两种即扩增与不扩增，故在产生非特异性扩增时是难以进行后续鉴定的；03产物相当复杂，无法进行后续的回收、鉴定、克隆等基因工程操作。04

NASBA的优缺点NASBA是种RNA扩增法，因此其主要应用是对RNA病毒的检测。灵敏度高、特异性强、保真度高。整个反应能在42℃条件下进行，经过两个小时的扩增可将模板RNA放大至109~1010倍。反应成分复杂、需要三种酶导致成本偏高、须重复加入逆转录酶和T7RNA聚合酶。

基于滚环只有在单链闭合状态并有相应引物存在下才能同温滚动复制的原理。基于连接酶连接、引物延伸与链置换扩增反应的一种等温核酸扩增方法。在恒温的条件下,可以产生大量的与环型探针互补的重复序列。RCA反应体系组成：噬菌体φ29DNA聚合酶、单链环状DNA模板和引物（一条或一对也可多条）。噬菌体φ2