DB4201_T540-2018_重要动物疫病监测样品采集技术规范_武汉市 .docxVIP

ICS65.020.01

B41 DB4201

武 汉 市 地 方 标 准

DB4201/T540-2018

重要动物疫病监测样品采集技术规范

DB4201/T540-2018

前 言

本规范按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本规范附录A、附录B为资料性附录。本规范由武汉市动物疫病预防控制中心提出。本规范由武汉市农业委员会归口。

本规范起草单位：武汉市动物疫病预防控制中心、烟台出入境检验检疫局、蔡甸区动物疫病预防控制中心。

本规范主要起草人：张四化、尹伟力、阮征、刘开武、王雪、万云、赵静、吴建英、陈橙、吴颢、杜娜、宫时玉。

本规范首次发布。

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重要动物疫病监测样品采集技术规范

1 范围

本规范规定了重要动物疫病监测样品采集的一般要求，包括采样原则和要求、样品类别和数量、采样前准备、样品采集、采样记录、样品的包装、样品的保存和运输等。

本规范适用于本地动物防疫机构技术人员及养殖企业技术人员开展相关采样工作。

2 规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范NY/T3075畜禽养殖场消毒技术

中华人民共和国农业部农医发2017年第25号病死及病害动物无害化处理技术规范中华人民共和国农业部公告第503号高致病性动物病原微生物菌（毒）种或者样本运输包装规范

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无菌操作

用于防止微生物进入样品或其它无菌范围的操作技术。

4 采样原则和要求

4.1 采样人员必须是兽医技术人员，具备动物传染病相关知识，熟练掌握各种采样技术。4.2 个人安全防护和消毒隔离按照NY/T3075的要求执行。

4.3 凡发现动物有急性死亡，在排除炭疽后方可剖检、取样。

4.4 解剖时先胸腔后腹腔，先取实质性器官，后取肠道等易污染的组织器官及内容物。

4.5 病死动物要在隔离区（下铺塑料布）或实验室剖检、取样，剖检后的动物尸体、废弃物等要按《病死及病害动物无害化处理技术规范》进行无害化处理。

5 样品类别和数量

5.1 样品类别

5.1.1 抗体监测样品包括全血、血清、禽蛋等；

5.1.2 病原监测样品包括分泌物、组织、粪便、精液、皮肤样品等。

5.2 样品数量

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塑料离心管（2mL、10mL、15mL、50mL）、玻璃容器、自封袋、试管架、离心管存放盒、铝盒、封口膜、冷冻剂、防震材料、采样箱、保温箱、胶布等。

6.3 防护用品

口罩、一次性PE手套或乳胶手套、防护服、防护帽、防护眼镜、胶靴、消毒液等。

6.4 样品保存液

6.4.2 根据所采样品的种类和要求，准备不同类型并分装成适量的保存液。6.4.3 pH7.4磷酸盐缓冲液（PBS，配制方法见附录A.1）

6.4.4 pH7.4甘油PBS（配制方法见附录A.2）6.4.5 棉拭子保存液（配制方法见附录A.3）6.4.6 粪便保存液（配制方法见附录A.4）6.4.7 30％甘油PBS（配制方法见附录A.5）6.4.8 50％甘油PBS（配制方法见附录A.6）

6.5 记录用品

不干胶标签、签字笔、圆珠笔、油性记号笔、采样登记表和样品编号表（见附录B.3、附录B.4、附录B.5）等。

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颈静脉位于颈部侧面颈静脉沟内，采血时将牲畜保定，手指压迫颈静脉近心端，使血管怒张，针头与皮肤呈45°角由下向上刺入血管，见有血液回流时，把注射器活塞向外拉使血液流入针筒。

7.1.2.5 禽翅静脉采血

禽侧卧保定后，将禽翅翻开，暴露翅静脉，拇指按压翅静脉近心端，使之怒张，针头由近心端向远心端方向平行刺入静脉，放松对近心端的按压，缓慢抽取血液。

7.1.2.6 禽心脏采血

参照NY/T541中6.1.2.6规定执行。

7.1.3 血样的处理

7.1.3.1 全血

将采集的全血立刻注入装有抗凝剂的试管中，轻轻摇动，充分混匀。血液抗凝可选用以下四种方法：a)5mL全血加入0.1mL10％乙二胺四乙酸二钠溶液。

b)5mL全血加入0.5mL3.8％枸椽酸钠（柠檬酸钠）溶液。c)5mL全血加入0.1mL1％肝素钠溶液。

d)使用市售商品抗凝管。

7.1.3.2 血清

7.1.3.2.1 将采集的全血在室温下（20℃～25℃）倾斜30°角放置2小时～4小时，待全血凝固并析出

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用棉拭子擦拭笼具表面、笼具周围、垫料、饲槽、饮水、粪便等禽舍内环境部位，分别置于含