组织培养与植物转基因.pptVIP

4.7脂质体介导法原理：脂质体是由人工构建的磷脂双分子层组成的膜状结构，把用来转染的DNA分子包在其中，通过脂质体与细胞接触，将外源DNA导人受体细胞。包装成脂质体的DNA的转染串比裸露的DNA的转染率高出100倍。如先用PEG处理培养的受体细胞，使其易吸收培养基中的脂质体，可提高转染率10—20倍。在正常情况下，每个细胞平均可吸收1000个左右的脂质体。这是哺乳动物转基因研究中常用的方法之一。*第30页，共49页，星期日，2025年，2月5日4.8激光微束穿孔法原理：利用直径很小（纳米级）、能量很高的激光微束可引起细胞膜可逆性穿孔的原理，在荧光显微镜下用激光处理细胞，处于细胞周围的重组DNA随之进入细胞。此方法最适用于活细胞中线粒体和叶绿体等细胞器的基因转移。*第31页，共49页，星期日，2025年，2月5日*第32页，共49页，星期日，2025年，2月5日植株再生是基因转移的关键步骤，直接决定能否获得转基因植株。两种形式：一种是愈伤组织再生另一种是直接再生，从外植体直接诱导出芽而不经过愈伤组织的分化。转墓因植株再生的方式与一般植株再生的方式相同，主要区别是转基因植株的再生受外源基因、载体系统、抗生素、转化过程的影响。5转基因植株的再生及其检测方法5.1转基因植株再生*第33页，共49页，星期日，2025年，2月5日常采用报告基因作为标记，以便快速检测。主要采用分子生物学方法检测，包括：聚合酶链式反应(PCR)、SouthernBlot、NorthernBlot和WesternBlot等方法。进行分子生物学检测以后还要进行生物学鉴定，以确定基因是否可以正常地表达性状，并稳定地遗传给后代。如果一些有价值的目的基因被转入，还必须鉴定基因的功能及其表型。5.2转基因植株的检测*第34页，共49页，星期日，2025年，2月5日如转化抗病毒基因：要对转基因植物进行病毒接种，以鉴定抗病毒能力。若转化的基因为抗除草剂基因：还要对植物喷洒除草剂进行检测。若转基因植物是食用粮食作物或油料：还要通过转基因植物的安全性检测，以免对人类和环境造成危害。如果转化的是花色素合成酶基因：则凭肉眼就可直观鉴定花色变化。*第35页，共49页，星期日，2025年，2月5日**组织培养与植物转基因*第1页，共49页，星期日，2025年，2月5日植物基因工程是指把不同生物有机体的DNA（或基因）分离提取出来，在体外进行酶切和连接，构成重组DNA（RecombinantDNA）分子，然后转化到受体细胞（大肠杆菌）使外源基因在受体细胞中复制增殖，然后借助生物的或理化的方法将外源基因导入到植物细胞，进行转译或表达。也称为植物遗传转化、植物转基因等。1植物基因工程的概念*第2页，共49页，星期日，2025年，2月5日植物基因工程是80年代开始兴起和发展起来的一门新技术，它是在分子遗传学的理论基础上，综合采用了分子生物学、微生物学和植物组织培养的现代方法和技术建立起来的。转移的目的基因可从动物、人、植物或微生物中获取。植物基因工程首先是随原核生物的基因工程的发展而得以发展。大肠杆菌，酵母，动植物细胞。*第3页，共49页，星期日，2025年，2月5日植物基因工程发展迅速。自从1983年首例转基因植物（烟草）诞生以来，现在已有100多种植物通过基因工程技术获得了转基因植株，包括番茄、辣椒、茄子、马铃薯、胡萝卜、芹菜、莴苣、甜瓜、黄瓜、白菜、甘蓝、花椰菜、芥菜、石刁柏、洋葱、柑橘、柿、杨树、桉树等。*第4页，共49页，星期日，2025年，2月5日2植物基因工程的载体Ti—载体其它载体RNAi*第5页，共49页，星期日，2025年，2月5日根癌农杆菌（Agrobacteriumtumefaciens）的Ti质粒（Tumor-inducingplasmid）的改建与利用，从而开创了植物基因工程的新纪元。根癌农杆菌*第6页，共49页，星期日，2025年，2月5日*第7页，共49页，星期日，2025年，2月5日*第8页，共49页，星期日，2025年，2月5日*第9页，共49页，星期日，2025年，2月5日T－DNA*第10页，共49页，星期日，2025年，2月5日植物基因工程中，我们把接受外源(目的)基因的生命体系称为“受体”。受体包括：叶圆片(盘)、胚性愈伤、胚状体、愈伤组织、悬浮细胞、原生质体等不同的形态。其基本形态还是细胞。叶圆片与农杆菌共培养是最简单的转化方法；愈伤组织的转化效率高、生长速度快，是快速检测外源基因表达的最好受体；原生质体则是单克隆转化的最佳材料。3植物基因转化