氯霉素眼药水的高效液相色谱分析-PH.pptxVIP

氯霉素眼药水的高效液相色谱分析彭花萍仪器分析实验

01了解高效液相色谱的基本原理02了解高效液相色谱仪的结构及正确使用03学习外标法测定组分的含量目的要求：

色谱起源石油醚碳酸钙颗粒色素混合物色谱分离组分色谱的发明人俄国科学家：M.S.Tswett提出经典液相色谱植物的石油醚提取液在碳酸钙吸附剂填充的玻璃管中分离出叶绿素及其他色素流动相：携带样品流过整个系统的流体固定相：静止不动的一相，色谱柱

色谱法分离的基本原理：各组分性质结构差异与固定相相互作用差异随流动相移动的速度不等反复多次分配平衡(吸附—解吸)保留时间不同达到分离效果A+B+CABCCBACBACCB色谱洗脱过程与色谱图t，minABC信号

色谱法：利用组分在两相间分配系数不同而进行分离的技术色谱定义色谱是一种分离技术.色谱的主要目的是对混合物中的目标物分离和定量色谱图即色谱柱流出物通过检测器时所产生的响应信号对时间的曲线图，其纵坐标为信号强度，横坐标为保留时间。

保留体积VR调整保留体积VR死体积V0峰面积相对保留值保留指数V=t.Fc；Fc为流动相流速保留值区域宽度W1/2=2.335σW=4σW1/2W

液相色谱按流动相与固定相的分子聚集状态分类流动相固定相气体(gas,G)液体(liguid,L)超临界流体(supercrtticalfluid,SF)固体(solid,S)GSCLSCSFSC液体(liguid,L)GLCLLCSFLC化学键合相(bondedphase,BP)GBPCLBPCSFBPC气相色谱液相色谱超临界色谱

HPLC液相色谱：以液体作为流动相的色谱分离方法适用于高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的化合物的分析流动相具有运载样品分子和选择性分离的双重作用1是一种区别于经典液相色谱，基于仪器方法的高效能分离手段：2高精度、耐高压的输液泵3高性能的色谱柱4高灵敏度的检测器5敏度高（10-9～10-12g）选择性高（同分异构，旋光异构）分析速度快分离性能好05进样量小（1-100mL）HPLC特点

HPLC应用领域10生命科学（蛋白质、多肽）食品（孔雀石绿、苏丹红）环境（多环芳烃、农残、微嚢藻毒素）化学品（邻苯二甲酸、醛、酮、药物中间体）临床分析（药物代谢）药物分析（抗生素、维生素）EDCBAF

液相色谱的基本流程图流动相高压泵色谱柱检测器高压输液系统分离系统检测系统记录系统AEGBCDF进样阀进样系统预备柱①②③④⑤

HPLC分析过程12分析前，选择适当的色谱柱和流动相，开泵，冲洗柱子，待柱子达到平衡而且基线平直后，用微量注射器把样品注入进样口，流动相把试样带入色谱柱进行分离，分离后的组分依次流入检测器的流通池，最后和洗脱液一起排入流出物收集器。当有样品组分流过流通池时，检测器把组分浓度转变成电信号，经过放大，用记录器记录下来就得到色谱图。色谱图是定性、定量和评价柱效高低的依据。

美国Agilent美国Waters日本岛津常用的高效液相色谱仪LC-15C

4.2.2高效液相色谱主要部件泵输液系统主要部件之一，压力：15～35MPa。提供高压流动相应具有压力平稳，脉冲小，流量稳定可调，耐腐蚀等特性。

(2)进样装置流路中为高压力工作状态，通常使用耐高压的六通阀其结构如图所示：泵柱进样排放泵排放柱进样六通阀是很好的定量装置，使得高效液相色谱的进样量得到准确的控制。定量环装填状态进样状态

色谱柱（C18柱，ODS）ODS柱是一种常用的反相色谱柱，也叫C18柱；由于它是长链烷基键合相，有较高的碳含量和更好的疏水性，适合分离有机物，因此在分析工作中应用的最为广泛。常用流动相：水、甲醇、乙腈

目前最普遍的检测器测量通过溶液后的紫外或可见光光强度的损失吸光度与样品浓度呈线性关系在被测物的最大吸收波长处检测时灵敏度最大紫外检测器朗伯—比尔定律

眼药水中的氯霉素氯霉素滴眼液用于治疗由大肠杆菌、流感嗜血杆菌、克雷伯菌属、金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌和其他敏感菌所致眼部感染，如沙眼、结膜炎、角膜炎、眼睑缘炎等。为无色或几乎无色的澄明液体。其主要成份氯霉素，辅料为硼酸、硼沙、氯化钠、防腐剂等氯霉素

条件：需要已知浓度的标准样品待测成分与杂质间分离良好对照品20ul成份A样品20uL成份A峰面积A样品峰面积A对照外标一点法色谱定量：峰面积与样品浓度成正比。已知浓度的氯霉素溶液眼药水稀释液

氯霉素含量的测定精密吸取眼药水10mL，用7:3的水:甲醇溶液稀释至250.0mL，配制成眼药水的稀释溶液1、对照品配制（