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研究稀有人参皂甙菌株的高转化率筛选和优化鉴定方法

目录

研究稀有人参皂甙菌株的高转化率筛选和优化鉴定方法（1）．．．．．．4

内容概要．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4

1.1研究背景与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6

1.2人参皂苷概述及其生物合成途径．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7

1.3稀有人参皂苷菌株筛选的必要性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．9

1.4国内外研究现状．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．11

材料与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14

2.1菌种来源与保藏．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．16

2.1.1实验菌种来源．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．18

2.1.2菌种保藏条件．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．21

2.2培养基设计与优化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．22

2.2.1基本培养基配方．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23

2.2.2添加剂筛选与浓度梯度实验．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．24

2.3发酵条件优化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．25

2.3.1种子培养条件．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．28

2.3.2发酵参数研究．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．30

2.4稀有人参皂苷含量测定方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．35

2.4.1提取方法比较与选择．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．38

2.4.2色谱分析方法建立．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．41

2.5菌株高转化率筛选方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．45

2.5.1初筛指标设定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．47

2.5.2筛选流程设计．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．47

2.6菌株鉴定方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．53

2.6.1形态学观察．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．54

2.6.2生化鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．55

2.6.3分子生物学鉴定（如16SrDNA序列分析）．．．．．．．．．．．．．．．．57

结果与分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．58

3.1不同培养基对菌株生长及人参皂苷积累的影响．．．．．．．．．．．．．．58

3.1.1碳源比对生长及产物的影响．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．62

3.1.2氮源比对生长及产物的影响．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．67

3.1.3矿质元素对生长及产物的影响．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．70

3.2不同发酵条件对菌株生长及人参皂苷积累的影响．．．．．．．．．．．．71

3.2.1温度对发酵过程的影响．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．79

3.2.2pH对发酵过程的影响．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．83

3.2.3转速对发酵过程的影响．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．83

3.2.4通气量对发酵过程的影响．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．85

3.3筛选得到的高转化率菌株．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．86

3.4高转化率菌株鉴定结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．87

3.5优化后发酵工艺参数验证．．．．．．．．．．．．