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探秘ASP-1蛋白佐剂功能区：重组表达、免疫增效及机制解析

一、绪论

1.1研究背景与意义

疫苗接种作为预防传染病最为有效的手段，在全球公共卫生领域发挥着关键作用。从早期的天花疫苗成功消灭天花这一全球性传染病，到如今各类疫苗广泛应用于预防如流感、乙肝等疾病，疫苗的发展历程见证了人类在疾病预防领域的重大突破。现代疫苗的应用范畴不断拓展，不仅用于传染病的预防，还在传染病治疗及非传染病（如癌症）的治疗研究中崭露头角。传统疫苗主要包括减毒活疫苗和灭活疫苗，而随着生物技术的飞速发展，新型疫苗如亚单位疫苗、结合疫苗、合成肽疫苗、基因工程疫苗等应运而生。这些新型疫苗具有纯度高、特异性强的显著优势，但也面临着分子小、免疫原性相对较差的问题，难以有效激发机体产生免疫应答，因此往往需要佐剂的辅助来增强其免疫原性或宿主对抗原的保护性应答。

佐剂在疫苗体系中扮演着不可或缺的角色，其作用机制主要是通过增强抗原的免疫原性，从而促进机体对抗原的免疫应答。以铝盐佐剂为例，它是目前广泛应用于人群疫苗且被美国FDA批准的佐剂，然而其存在明显的局限性，对于许多新型疫苗佐剂活性欠佳，尤其是在诱导细胞免疫方面较弱，并且对小分子抗原缺乏佐剂活性，无法满足新型疫苗不断发展的需求。新型疫苗佐剂的研发成为当下疫苗领域的研究热点，其组成形式丰富多样，来源广泛，主要涵盖油/水乳剂型、颗粒型、微生物衍生物型佐剂等。目前，已批准上市的新型疫苗佐剂屈指可数，如MF59和AS04等。MF59作为一种水包油乳剂，在高压条件下将角鲨烯与Tween-80和Span85混合后进行微流化，形成均一的小滴状乳液，已在欧洲国家批准用于流感亚单位疫苗，虽然免疫效果优于铝盐，但不良反应有所增加；AS04是葛兰素史克公司研发的乳剂，其新型佐剂系统用于乙型肝炎疫苗Fendrix获欧盟批准上市，安全性良好，但临床报道存在注射部位疼痛、头痛和疲乏等局部不良反应。由此可见，研发安全有效且适用于多种形式疫苗的佐剂迫在眉睫。

活化相关蛋白（ASP）是线虫体内一种具有高免疫原性的蛋白，同时也是重要的保护性抗原。其中，来自盘尾丝虫的Ov-ASP-1作为一种非毒素类蛋白，展现出了良好的佐剂活性，具有诸多独特优势。首先，使用极为方便，无需进行交联操作，只需与抗原简单混合即可发挥佐剂活性；其次，能够诱导机体产生平衡的免疫应答，激发小鼠产生Th1偏倚的、混合的Th1/Th2免疫应答，这种免疫应答模式有助于全面提升机体的免疫防御能力；再者，适用抗原范围广泛，不仅可以作为蛋白、灭活疫苗的佐剂，还能作为多肽抗原的佐剂，为多种类型疫苗的研发提供了新的可能性。然而，目前使用的全长为153个氨基酸长度的ASP-1蛋白作为免疫佐剂时，存在一些亟待解决的问题。一方面，蛋白在大肠杆菌中以包涵体形式表达，复性过程困难重重，导致产量极低，生产成本大幅增加，这在很大程度上限制了其作为佐剂在疫苗中的广泛应用。在复性过程中，大部分蛋白因无法形成正确折叠而大量析出，每升菌液获得的活性蛋白数量极少，使得获取活性蛋白的成本居高不下；另一方面，自身免疫原性过强，能够诱导机体产生针对自身的较高水平抗体。这些高水平抗体不仅有可能降低其佐剂活性，还可能增强对机体的不良反应，影响疫苗的安全性和有效性。

基于以上研究背景，本研究聚焦于ASP-1蛋白佐剂功能区的重组表达及其免疫增效作用。旨在通过深入分析ASP-1蛋白的结构特征，运用生物信息学方法精准设计佐剂活性功能区，并进行重组表达，从而获得免疫原性弱同时保留ASP-1佐剂活性功能区的重组蛋白。进一步深入分析其对不同类型抗原（包括蛋白和多肽抗原）的免疫增效作用及机制，为新型疫苗佐剂的研发提供坚实的理论基础和实验依据，具有重要的科学研究价值和实际应用意义。

1.2国内外研究现状

在佐剂的研究领域，国外起步相对较早，投入了大量的科研资源进行新型佐剂的研发与探索。以美国和欧洲为例，众多科研机构和大型药企长期致力于佐剂的研究，在佐剂的作用机制、新型佐剂的开发等方面取得了一系列重要成果。在微生物衍生物型佐剂的研究中，对细菌、病毒等微生物来源的成分进行深入挖掘，发现了多种具有潜在佐剂活性的物质，并对其作用机制进行了系统研究。在纳米颗粒佐剂方面，国外也处于领先地位，利用纳米技术制备出各种新型纳米佐剂，如脂质体纳米佐剂、聚合物纳米佐剂等，对其在疫苗中的应用进行了广泛研究，包括纳米佐剂与抗原的结合方式、在体内的递送机制以及免疫调节作用等。

国内在佐剂研究方面虽然起步稍晚，但近年来发展迅速，取得了显著的研究成果。众多高校和科研院所积极开展佐剂相关研究，在微生物衍生物型佐剂领域，对国内特有的微生物资源进行研究，筛选出具有自主知识产权的潜在佐剂成分。同时