如何选择液相色谱保护柱.pdfVIP

如何选择液相色谱保护柱

来自于色谱系统的污染主要指，HPLC仪器系统中部件磨损而产

生的固体颗粒，以及流动相系统过滤不完全残留的固体颗粒。来自于

样品的污染主要指未完全溶解的样品或者已完全溶解的样品进入色

谱系统中，由于样品溶剂和流动相溶剂对样品溶解存在的溶解度差异，

导致沉淀析出污染系统。

特别是对于中药、天然产物、合成中间体及生物药品的检测，

因基质的复杂性，色谱柱受污染的情况会更加严重。污染会导致色谱

系统压力升高、色谱柱塌陷、填料变色等，从而带来检测成本高，测

试结果不准确等各种影响。

以下几种情况建议使用保护柱：

1、中药、天然产物及合成中间体等基质较复杂的样品分析--因溶解

性差异导致样品析出而污染分析柱的情况比较严重，梯度洗脱时影响

更大。

2、生物样品分析--因样品的不可逆吸附导致的污染，保护柱可先于

分析柱承受这种污染，从而延长分析柱寿命。

保护柱很重要，但选择合适的保护柱更重要，选择或使用不当也可能

带来截然相反的效果。

保护柱分类及选择

从材质上分：不锈钢材质和PEEK(聚醚醚酮)材质,PEEK材质优缺

点--样品对金属离子比较敏感时，选择PEEK材质比较合适，比如某

些蛋白分板会用到PEEK材质的分析柱，主要就是考虑到这方面的因

素；不锈钢材质优缺点--大部分小分子化合物的分析，选择不锈钢材

质保护柱居多，特别是当流动相体系使用到四氢呋喃（THF）或DMSO

等一些溶解性较强的溶剂时，必须选择不锈钢材质，甚至对于HPLC

系统的管路也需要替换成不锈钢材质，因THF对于PEEK管路有相当

强的腐蚀作用。

从结构上分：卡套式（柱芯+柱套）和直接填装短柱

直接填装短柱公优缺点--这种结构的保护柱实质就是短柱优缺

点--这种的保护柱实质就是短的色谱柱，一般填装的填料跟分析柱填

料完全一样，生物样品分析中，用这种类型保护柱居多，除可过滤一

些不溶颗粒外，还可除去一些在分析柱上易吸附的杂质。缺点是，一

次性使用，污染严重时，只能报废。

卡套式保护柱优缺点--卡套式保护柱的柱套可反复使用，柱芯污

染后可替换，厂家会提倡配套瓣保护柱芯，但购买时需要注意，柱芯

中有与分析柱匹配的填料，需要确认柱芯中的填料类型再购买。同时，

柱芯与柱套需是来源一同一厂家的同一规格否则，会存在匹配上的差

异，导致峰型异常或者漏液。

从连接方式上分：独立式和直连式

独立式保护柱优缺点

保护柱和分析柱这间用一段管路连接，不用担心与分析柱在连接

上的匹配问题。但使用管路连接时，连接不当容易产生死体积。

直连式保护柱优缺点--保护柱接口带螺纹，可直接与分析柱连接，

死体积小，UPLC分析时建议选择直连式保护柱子缺点：购买时需保

证接口与分析柱匹配。

保护柱选择考虑以下几方面因素：

1：除非特殊情况，一般选择填料基质与分析柱基质完全相同的保护

柱。

2、选择保护柱尺寸可按柱体积计算，保护柱体积按分析柱体积的

5%-10%即可；如4.6*250mm的分析柱体积约为4ml，保护柱体积可选

择在0.2-0.4ml之间为宜。同时，保护柱内径应与分析柱内径相同或

相当。

保护住使用注意事项：

1、独立式保护柱与分析柱连接时，连接管路尽可能短，且接口切面

平常，尽量减少死体积以降低柱外展宽效应。

2、卡套式保护柱一般未标注液流方向，使用时最好自行标注，并按

照标注方向来使用，以免正反向使用后，截留的杂质污染分析柱。

3、直接填装的短柱型保护柱，出现柱压升高或峰型变差时，可不接

分析柱进行反向清洗，清洗溶剂可参考分析柱清洗溶剂。

4、卡套式保护柱，柱芯替换时，注意柱芯与柱套是否存在方向上的

匹配，同时不易旋拧过紧，以防滑丝。

5、保护柱或柱芯一般不建议超声清洗，因可能对填料表面修饰有影

响。

6、如同一保护柱配不同的分析柱使用，每次使用前，保护柱需先清

洗并用流动相平衡保护柱一段时间后，再接分析柱使用。

保护柱与柱前过滤器的区别和使用：

使用保护柱的目的在于延长分析柱的使用寿命，当分析柱造价昂

贵时，保护柱的价值尤其能体现，某些情况下，当使用的分析柱本身

价格便宜，保护柱并非必选，推荐使用柱前过滤器更合适。

柱前过滤器与保护柱两者外形相似，差异主要在于：保护柱内芯

装有填料，而柱前过滤器内芯是可更换的滤片（一般为带也的不锈钢

烧结板）

因此，从结构可以推测使用上的差异：柱前过滤器--通用性