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高效液相常见问题

一、色谱分析的准备工作：

在药物分析部门的工作中，对于液相色谱分析工作者而言，进行的

药物分析的药物种类或品种时很多的，所以，我们在进行分析工作前，

我们要对自己所要进行的药物品种和色谱柱进行统计，尽量做到专药

专柱、专柱专用。这样，我们在进行药物分析和检测工作时，又不会

造成色谱柱的交叉污染。

在做到药物分析用的色谱柱专药专柱用之后，可以明确知道该柱的流

动相中缓冲液与有机溶剂的配比，快速进行流动相的配制（因为不同

厂家和不同型号的色谱柱，即使分离分析同一品种的药物，其流动相

的配比都是不尽相同的）。对于以后流动相的配比能做到有的放矢，

也就是说，相对药物的保留时间和流动相的流速也就相对固定了下来。

所以，在之后的相同药物的分析可就能顺手拿来做好了，不存在在以

后的试验中还去摸索不同柱子的流动相的配比了。在以往的试验中，

最常出现的情况时，没有做到专柱专用，今天做这药物药调节流动相

配比，明天又换根柱子，又是调节流动相配比一番，耗时又缺乏对这

种药物分析时的保留时间的不可重现性。让非专业人员看了觉得不可

理解。同时，对试验者本人来说，也可具有不同时间的试验比较，具

有后续试验的参考意义。

二、分析前，对色谱柱的预处理和平衡过程重视。在每天的实验前，

一近实验室，就立即要安排好今天该做的分析工作，连接好今天药物

分析所用的专柱，打开色谱泵，用流动相中的相应有机溶剂的含10%

有机溶剂的水溶液进行排气和冲洗色谱柱和管路，冲水30分钟左右，

将色谱柱中的纯有机溶剂替换掉，然后再用流动相进行足够时间的平

衡，大约1小时左右。此时，一般来说，色谱柱应该说是够平衡了。

注意在色谱柱平衡半个小时时，打开检测器，在平衡近1小时时，打

开色谱工作站，点击查看基线，看基线是否走平直。在基线走平直后，

方可进行分析检测，才能保证检测结果的准确性和保留时间的重复性。

三、分析前的流动相脱气、色谱管路及泵内排气和每天必须要做的

事情，否则，在实验过程中，就会造成（1）泵的流速不稳、有时候

流速甚至相差甚远，（2）泵压来回波动很大，（3）检测器采集的图像

基线很难稳定和走直，出现基线漂移和波动。（4）色谱峰面积不重现，

最麻烦的是好好的色谱峰上突然出项和汽泡锯齿，影响峰面积的读取。

四、色谱分析过程中，一般是采用定量环进行手动进样或者是采用

自动进样器进行进样，一般来说，能保证较好的进样量的重现性。所

以在进行进样检测时，关键的步骤时溶液的配制，要做到对照品和待

测样品的充分溶解，同时也要充分摇匀，使溶液均有均一性。六通阀

进样器，若采用手动方式，应注意的是：你进样时，是将其从load

位置扳到inject的位置，有的人是采取进样后一分钟左右又将其反扳

回至load位置，这种习惯是很好的，因为在load位置，管路不通过

定量环，可以减少定量环的承压时间，保护定量环。但是要注意，你

在这分析过程中，你始终要保持相同的处理方式，以保证测量结果的

重现性。

在我们的试验分析中，我们采用称量样品和对照品的是：采用干燥

洁净的2mL的小烧杯进行称量，然后小烧杯连同药品一起放在普通

漏斗中，将漏斗插入容量瓶，加水或流动相进行溶解，冲洗漏斗和容

量瓶，取下漏斗，加水或流动相至刻度，充分摇匀，进行进样分析。

我认为这种称样和溶样方式比用称量纸称量和容样方便和准确。毕竟

称量纸或多或少的具有吸湿性的，影响称量的准确性。因为在进行液

相色谱分析中，药保证分析结果的准确性，称样和容样也是分析结果

准确性的关键的一步。

五、在样品的采集和数据或图像结果分析的过程中，要注意的是：

因为色谱工作站的处理方式和能力是有限的，因为它只是人脑的机械

反应结果。在色谱工作站的设置上，色谱工作站的积分设置方式都设

置有两种：一种是自动积分；一种是手动积分。这两种积分方式各有

其有点，但各也有其不足之处。对于仪器的自动积分方式，虽然是计

分方式是方便，但是你自己去仔细观察，有时候它的积分位置很不准，

所以相对来说，它所积分的峰面积结果自然是不准确的了，你若采用

这种积分不准确的峰面积结果去进行计算，自然是不准确的。有时候

你会发现，你对某一药物的平行含量分析时，发现两个平行样的结果

不平行，有时候不是你的操作引起的，是色谱工作站自动积分不准确

的原因。另一种是手动积分方式，很多人是很提倡这种积分处理方式

的，但是这里就存在有对图形和数据的认知的熟练程度，不同的人操

作时的结果是有很大出入的。也就是说这种积分方式的难度就是：随