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外泌体介导的骨再生修复策略研究
目录
一、绪论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4
1.1研究背景与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4
1.1.1骨缺损修复的挑战与需求．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6
1.1.2组织工程与再生医学的发展概况．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．8
1.2外泌体的生物学特性及作用机制．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．9
1.2.1外泌体的来源与结构特征．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．13
1.2.2外泌体参与细胞通讯的途径．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．15
1.2.3外泌体在骨骼调节中的潜在功能．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．17
1.3外泌体在骨再生领域的应用研究进展．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．20
1.3.1外泌体促进成骨分化的相关研究．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23
1.3.2外泌体改善骨微环境的研究现状．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．25
1.4本研究的切入点与创新之处．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27
二、外泌体来源与分离纯化技术．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．29
2.1外泌体潜在来源的选择与比较．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．31
2.1.1间充质干细胞来源外泌体．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32
2.1.2肿瘤细胞来源外泌体的相关探索．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．35
2.1.3其他生物来源外泌体．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．36
2.2外泌体的高效分离纯化方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．38
2.2.1大规模外泌体提取技术．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．39
2.2.2去除细胞碎片与杂质的方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．43
2.2.3新型分离技术探索．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．51
2.3外泌体鉴定与质控标准．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．53
2.3.1传透电镜观察形态学特征．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．58
2.3.2分子标记物鉴定（CD9,CD63,CD81等）．．．．．．．．．．．．．．．．．60
2.3.3质量评价标准．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．63
三、外泌体促进骨再生的生物学机制．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．64
3.1外泌体对成骨细胞增殖与分化的调控．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．65
3.1.1信号转导通路介导的成骨作用．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．67
3.1.2表观遗传修饰对成骨细胞表型的调控．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．69
3.2外泌体对软骨细胞及骨软骨祖细胞的影响．．．．．．．．．．．．．．．．．．71
3.3外泌体对血管生成与骨组织营养的支撑作用．．．．．．．．．．．．．．．．74
3.3.1促进内皮细胞行为．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．76
3.3.2介导血管化微环境构建．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．79
3.4外泌体抑制炎症反应与免疫调节在骨修复中的作用．．．．．．．．．．81
四、外泌体介导的骨再生修复策略构建．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．83
4.1外泌体载荷系统的设计与构建．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．84
4.1.1药物或生长因子共载于外泌体．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．88
4.1.2外泌体与其他生物材料复合．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．89
4.2外泌体原位与离体骨再生模型的建立与应用．．．．．．．．．．．．．．．．91
4.2.1动物骨缺损模型研究．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．93
4.2.2体外成骨模型与生物相容性评价．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．9
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