分子生物学基本技术：PCR原理与操作及DNA序列分析.pdfVIP

PCR的反应原理及具体操作

序列分析的基本原理

子印迹基本原理

PCR的反应原理及具体操作

序列分析的基本原理

子印迹基本原理

聚合酶链反应

(polymerasechainreaction;PCR)

PCR：在体外由引物(primers)介导,利用酶促反应获得

特异组或c的专门技术，又称扩

增技术。

反应体系的基本成分：模板、

引物、四种dNTP、耐热性

聚合酶、以及含有Mg2+的缓冲液

聚合酶链反应（聚合酶链反应；PCR）

pcr：在体外由引物（第一个）介导，利用酶促反应获得

利用酶促反应获得cc的专门技术，又称扩

又称扩

反应体系的基本成分：模板引

物、四种dntp、耐热性聚

2+

合酶、以及含有mg的缓冲液

PCR的基本过程

三个基本步骤

①变性(denaturation):双链模板解开成单链

94–96℃，速度快，1min

②退火(annealing)：两个寡核苷酸引物结合到单链模板

退火温度依赖Tm(Tm-5)

Tm4(G+C)+2(A+T)℃

③延伸(extension)：沿着引物，根据碱基互补配对规律

延伸温度一般72℃

PCR的基本过程

三个基本步骤

1变性（dainuration）：双链模板解开成

单链94–96°C，速度快，1分钟2退火（退火）：

两个寡核苷酸引物结合到单链

模板

退火温度依赖tm（Tm‑5）tm4（g+c）

+2（a+t）°C3延伸（扩展）：沿着引物，根据

碱基互补配对，根据碱基互补配对

规律

延伸温度一般72°C

PCR—PolymeraseChainReaction

变性

退火

延伸

PCR‑聚合酶链反应

变性

退火

延伸