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PPAR和MAPK信号途径对分枝杆菌感染巨噬细胞程序性死亡调控的研究
目录
内容概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4
1.1研究背景与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5
1.1.1分枝杆菌感染现状概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6
1.1.2巨噬细胞在免疫应答中的作用．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．8
1.1.3程序性细胞死亡与宿主防御．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．12
1.2相关信号通路概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．13
1.2.1过氧化物酶体增殖物激活受体信号系统介绍．．．．．．．．．．．．．．16
1.2.2酪氨酸蛋白激酶C信号网络介绍．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．18
1.3国内外研究进展．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．21
1.3.1PPAR与分枝杆菌感染关联性研究．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．22
1.3.2MAPK与细胞死亡调控研究．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．26
1.3.3两者通路交叉．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27
1.4研究目的与内容．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．29
1.4.1本研究拟解决的关键问题．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．31
1.4.2主要研究内容和技术路线．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32
巨噬细胞与分枝杆菌感染模型．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．37
2.1巨噬细胞生物学特性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．39
2.1.1巨噬细胞的来源与分化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．40
2.1.2巨噬细胞的功能状态转换．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．44
2.2分枝杆菌感染模型建立．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．46
2.2.1实验菌株与培养条件．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．49
2.2.2巨噬细胞感染模型的构建方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．50
2.3细胞程序性死亡分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．54
2.3.1细胞凋亡检测方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．56
2.3.2细胞坏死检测方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．57
2.3.3其他细胞死亡模式的考察．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．61
PPAR信号通路在分枝杆菌感染巨噬细胞中的调控作用．．．．．．．．．62
3.1PPAR通路相关分子检测．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．66
3.1.1PPAR亚型表达水平分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．69
3.1.2PPAR亚型转录激活活性验证．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．70
3.2PPAR通路调控巨噬细胞对分枝杆菌响应．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．72
3.2.1PPAR激动剂/拮抗剂对感染过程的影响．．．．．．．．．．．．．．．．．．．75
3.2.2PPAR通路影响下的分枝杆菌在巨噬细胞内存活情况．．．．．．．．77
3.3PPAR通路对巨噬细胞程序性死亡的影响．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．79
3.3.1PPAR信号对细胞凋亡的影响．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．81
3.3.2PPAR信号对细胞坏死的影响．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．83
MAPK信号通路在分枝杆菌感染巨噬细胞中的调控作用．．．．．．．．．84
4.1MAPK通路相关分子检测．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．86
4.1.1不同MAPK亚型（ERK,JNK,p38）表达与磷酸化分析．．．．．．．87
4.1.2MAPK通路关键激酶活性检测．．．．．．．．．
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