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HPLCBusinessDeptShimadzuCorporation色谱基础知识第1页，共41页，星期日，2025年，2月5日一、色谱起源色谱法起源于20世纪初，1906年俄国植物学家米哈伊茨维特用碳酸钙填充竖立的玻璃管，以石油醚洗脱植物色素的提取液，经过一段时间洗脱之后，植物色素在碳酸钙柱中实现分离，由一条色带分散为数条平行的色带。由于这一实验将混合的植物色素分离为不同的色带，因此茨维特将这种方法命名为色谱法。第2页，共41页，星期日，2025年，2月5日石油醚碳酸钙颗粒色素色谱组分第3页，共41页，星期日，2025年，2月5日色谱的主要目的是对混合物中的目标物分离和定量

色谱法：利用组分在两相间分配系数不同而进行分离的技术流动相：携带样品流过整个系统的流体固定相：静止不动的一相，色谱柱第4页，共41页，星期日，2025年，2月5日色谱优点同时分析分离性能好灵敏度高（ppm-ppb微克-纳克）进样量小（1-100μL）第5页，共41页，星期日，2025年，2月5日色谱分类以流动相状态为标准划分类型。用气体作为流动相的色谱法称为气相色谱法GaschromatographyGC.用液体作为流动相的色谱法称为液相色谱法LiquidchromatographyLC.第6页，共41页，星期日，2025年，2月5日HPLCVSGC液相色谱：适用于高沸点大分子强极性热稳定性差的化合物的分析，流动相具有运载样品分子和选择性分离的双重作用气相色谱：适用于沸点低，热稳定性好的中,小化合物的分析。流动相只起到运载样品分子的作用第7页，共41页，星期日，2025年，2月5日HPLCVSGC高效液相色谱法采用高压输液泵输送流动相及特殊规格填料固定相等，分离效能高，应用范围广,如氨基酸蛋白质生物碱维生素有机酸农药，都可用高效液相色谱法进行分析气相色谱法虽然也具有快速分离效率高用样少等优点，但它要求样品必须能够汽化，从而受到样品的挥发性限制。第8页，共41页，星期日，2025年，2月5日HPLC的分离类型正相色谱(NP-HPLC)反相色谱(RP-HPLC)反相离子对色谱(RPIC)离子交换色谱(IEC)空间排阻色谱(SEC)手性化合物分离模式(Chiralseparationmode)第9页，共41页，星期日，2025年，2月5日液相色谱按两相极性不同分为:正相色谱反相色谱 化合物保留时间随流动相配比的变化 不同极性的化合物出峰顺序第10页，共41页，星期日，2025年，2月5日反相HPLC色谱柱C18(ODS)typeC8(octyl)typeC4(butyl)typePhenyltypeTMStypeCyanotype-Si-C18H37SiNon-polarproperty第11页，共41页，星期日，2025年，2月5日反向色谱:反向色谱用的填料常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。适用于能溶于水/有机混合物的中性或非离子化合物样品反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、甲醇、乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。

第12页，共41页，星期日，2025年，2月5日正相HPLC色谱柱硅胶型 氰基型 氨基型糖类分析二醇基型蛋白质分析SilicagelSiSi-Si-CH2CH2CH2CN-Si-CH2CH2CH2NH2-Si-CH2CH2CH2OCH(OH)-CH2(OH)ModifiedSi第13页，共41页，星期日，2025年，2月5日正相色谱：固定相通常为硅胶以及其他具有极性官能基团，如（NH2，APS）和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。适用于不溶于水/有机混合物的亲脂类样品使用的流动相（极性相对比固定相低，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。第14页，共41页，星期日，2025年，2月5日液相色谱流程图输液泵进样器色谱柱柱温箱检测器溶剂数据处理第15页，共41页，星期日，2025年，2月5日色谱柱基本性能参数硅胶纯度填料硅胶的纯度与残留金属离子浓度尺寸填料床的长度和内径粒径平均颗粒直径，通常3-10μm孔径颗粒的孔或者腔的平均尺寸，范围80-100A