沙门氏菌的检测.pptxVIP

沙门氏菌的检测;一、实验目得;二、实验器材;1、四硫磺酸钠黄绿(TTB)增菌液;蛋白胨10、0g蒸馏水1000mL

pH7、0±0、2牛肉膏5、0g

氯化钠3、0g

碳酸钙45、0g(碳酸钙可以调节ph,就是培养基在养菌过程中维持一定ph,否则ph过低,影响菌株生长另外还有筛选产酸菌得作用)

除碳酸钙外,将各成分加入蒸馏水中,煮沸溶解,再加入碳酸钙,调节pH,高压灭菌121℃,20min;硫代硫酸钠溶液;ＴＴＢ培养基使用方法和注意事项;

3、原理:四硫酸钠就是由硫代硫酸钠和碘经氧化生成而来,她对大肠菌群有抑制作用,对沙门氏菌无影响。因沙门氏菌具有四硫磺酸酶,能分解四硫磺酸钠,而大肠菌群没有这种酶,故生长受抑制。碳酸钙为缓冲剂,可使沙门氏菌不致因酸碱度改变而死亡。

;2、氯化镁孔雀绿增菌液(MM);MM增菌液各成分得作用;11;3、亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液;SC增菌液各成分得作用;4、亚硫酸铋(BS)琼脂;

将前三种成分加入300mL蒸馏水(制作基础液),

硫酸亚铁和磷酸氢二钠分别加入20mL和30mL蒸馏水中,柠檬酸铋铵和亚硫酸钠分别加入另一20mL和30mL蒸馏水中,

琼脂加入600mL蒸馏水中。然后分别搅拌均匀,煮沸溶解。冷至80℃左右时,先将硫酸亚铁和磷酸氢二钠混匀,倒入基础液中,混匀。将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠混匀,倒入基础液中,再混匀。调节pH,随即倾入琼脂液中,混合均匀,冷至50℃～55℃。加入煌绿溶液,充分混匀后立即倾注平皿。;BS培养基得原理;5、HE琼脂;②甲液得配制

硫代硫酸钠34、0g柠檬酸铁铵4、0g蒸馏水100mL

③乙液得配制

去氧胆酸钠10、0g蒸馏水100mL

④Andrade指示剂

酸性复红0、5g1mol/L氢氧化钠溶液16、0mL

蒸馏水100mL,将复红溶解于蒸馏水中,加入氢氧化钠溶液。数小时后如复红褪色不全,再加氢氧化钠溶液1mL～2mL。;制法

将前面七种成分溶解于400mL蒸馏水内作为基础液;将琼脂加入于600mL蒸馏水内。然后分别搅拌均匀,煮沸溶解。加入甲液和乙液于基础液内,调节pH。再加入指示剂,并与琼脂液合并,待冷至50℃～55℃倾注平皿。

注:①本培养基不需要高压灭菌,在制备过程中不宜过分加热,避免降低其选择性。;、HE琼脂得原理;6、SS琼脂配方;月示胨、牛肉粉??供碳源、氮源、维生素和矿物质;

乳糖、葡萄糖为可发酵得糖类;

三号胆盐、枸橼酸钠和煌绿抑制革兰氏阳性菌及大多数得大肠菌群和变形杆菌,但不影响沙门氏菌得生长;

硫代硫酸钠和枸橼酸铁用于检测硫化氢得产生,使菌落中心呈黑色;

中性红为pH指示剂,可把分解乳糖和不分解乳糖得细菌鉴别开,前者为红色菌落,后者为无色菌落

发酵糖产酸得菌落呈红色,不发酵糖得菌落为无色;

琼脂就是培养基得凝固剂。;1、前增菌:用无选择性得培养基使处于濒死状态得沙门菌恢复活力;

2、选择性增菌:使沙门氏菌优势繁殖,大多数其她细菌受到抑制;

3、选择性平板分离培养:分离出所需得细菌;

4、生化试验:鉴定分离出来得细菌就是否符合所检项目得细菌;

5、血清学鉴定:进一步鉴定。;加工过得样品:

称取25g(mL)样品放入盛有225mL缓冲蛋白胨水(BPW)得无菌均质杯,以8000～10000r/min均质1~2min,或置于盛有225mLBPW得无菌均质袋,拍击式均质拍打1~2min。液体样品不需均质,振摇混匀。

无菌操作将样品转至500mL锥形瓶中(如使用均质袋,可直接培养),36±1℃培养8～18h。

冷冻产品,应在45℃以下不超过15min,或2℃~5℃不超过18h解冻。

未加工样品:。。。。。;轻轻摇动培养过得样品混合物,

移取1mL,转种于10mL四硫磺酸钠煌绿(TTB)增菌液内,42℃±1℃培养18～24h。

同时,另取1mL,转种于10mL亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液内,36±1℃培养18～24h。;(3)分离---选择性平板分离;选择性琼脂;SS琼脂平板;;BS琼脂;BS上得菌落;BS＋;(4)生化试验;

1、三糖铁(TSI)试验

自选择性琼脂平板上分别挑取两个以上典型或可疑菌落,接种三糖铁琼脂,先在斜面划线,再底层穿刺,用一空白培养基作对照试验。

2赖氨酸脱羧酶试验:

接种三糖铁琼脂得接种针不要灭菌,直接接种赖氨酸脱羧酶试验培养基和营养琼脂平板,

于36±1℃培养18～24h,必要时可延长至48h。;三糖铁(TSI)琼脂试验;三糖铁(TSI)试验;思考题;赖氨酸脱