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基于智舌技术的致病性弧菌快速检测方法构建与效能探究

一、引言

1.1研究背景

弧菌（Vibrio）是弧菌科中的一属，为一大群菌体短小、弯曲成弧形的革兰氏阴性菌，其大小约0.5×1-5微米，多数以极生鞭毛运动，对酸度敏感，生长温度范围为20-40°C，可在普通营养琼脂上生长。弧菌广泛分布于自然界，尤其是淡水或海水中，与人类生活和健康密切相关。

弧菌的种类繁多，其中部分弧菌具有致病性，能引发人类和动物的多种疾病。致病性弧菌主要包括0139群霍乱弧菌、副溶血弧菌、拟态弧菌、河流弧菌、溶藻弧菌、辛辛那提弧菌、创伤弧菌、弗尼斯弧菌、少女弧菌、麦氏弧菌和鲨鱼弧菌等。这些致病性弧菌所导致的疾病涵盖了肠道感染、伤口感染、中耳炎、败血症等多个类型，严重威胁着人类的健康。例如，霍乱弧菌引发的霍乱是一种严重的肠道传染病，主要症状为剧烈的呕吐、腹泻和失水，若不及时治疗，死亡率甚高，属于国际检疫的烈性传染病；副溶血弧菌常通过烹饪不当的海产品或盐腌制品传播，引发食物中毒，症状包括腹痛、腹泻、呕吐和低热等，粪便多为水样，少数为血水样，还可能引起浅表创伤感染、败血症等；创伤弧菌则有“食肉菌”之称，是致死率最高的致病弧菌，广泛分布于水温较高的河海交界水域、近海、海湾及海底沉积物中，常寄生于贝壳类海洋生物，感染后约50%-70%的患者会在一两天内出现局部皮肤肿胀、疼痛明显，伤口周围或感染肢体末端皮肤呈黑紫色、有水疱，常伴有发热、腹痛、腹泻、呕吐、低血压等症状，病情进展迅速，严重者可发展为肌肉坏死和败血症，甚至有截肢和引起多脏器功能衰竭的风险。

随着全球气候变暖以及海洋生态环境的变化，致病性弧菌的生存和传播环境发生了改变，其引发的疾病呈现出愈发频繁和严重的趋势。同时，人们对海产品的消费需求不断增加，海产品的贸易和流通范围日益广泛，这也进一步加大了致病性弧菌传播的风险。一旦致病性弧菌污染海产品，通过食物链进入人体，就可能引发大规模的食源性疾病暴发，给公共卫生安全带来巨大挑战。

在这种严峻的形势下，对致病性弧菌进行快速、准确的检测显得尤为重要。传统的致病性弧菌检测方法，如细菌培养、生化鉴定和免疫学检测等，存在着诸多局限性。细菌培养法虽然是检测致病性弧菌的经典方法，但操作繁琐，需要经过多个筛选步骤，使用多种培养基，培养时间长，通常需要2-3天甚至更久才能获得检测结果，这在疾病暴发时，难以满足快速诊断和防控的需求；生化鉴定法主要基于细菌的生理生化特征进行鉴定，其准确性易受细菌生长状态、培养条件等因素的影响，且对于一些相近弧菌种属的细致分类存在困难；免疫学检测方法，如酶联免疫吸附试验（ELISA）等，虽然具有一定的特异性和灵敏度，但对设备和操作人员的要求较高，检测成本也相对较高，同时，还可能出现假阳性或假阴性结果。

随着科技的不断进步，新的检测技术不断涌现。智舌技术作为一种新兴的检测技术，为致病性弧菌的快速检测提供了新的思路和方法。智舌是一种基于PCR技术（聚合酶链式反应）的快速检测方法，它可以在几小时内检测到各种病原菌。该技术利用基于DNA逐步的扩增与捆绑，将细胞及其DNA标记，在芯片上特异性检测，并输出检测结果。智舌技术不需要培养，可以在短时间内同时检测多个菌种，具有快速、高灵敏度、高特异度和可靠性等优点。将智舌技术应用于致病性弧菌的检测，有望克服传统检测方法的不足，实现对致病性弧菌的快速、准确检测，从而为食品安全保障和公共卫生防控提供有力的技术支持。

1.2致病性弧菌概述

致病性弧菌作为弧菌属中的重要成员，涵盖了多种对人类和动物健康构成威胁的菌种。除了前面提及的霍乱弧菌、副溶血弧菌和创伤弧菌外，还有拟态弧菌、河流弧菌、溶藻弧菌、辛辛那提弧菌、弗尼斯弧菌、少女弧菌、麦氏弧菌和鲨鱼弧菌等。这些致病性弧菌在自然界中分布极为广泛，尤其在淡水、海水以及河口等水域环境中大量存在。它们能够在不同的生态位中生存和繁殖，部分弧菌还可以附着在水生生物体表或寄生于其体内，通过食物链的传递，增加了人类感染的风险。

不同种类的致病性弧菌在生物学特性上既有共性，也存在差异。它们均为革兰氏阴性菌，菌体形态短小且呈弯曲状，具有一根极生鞭毛，这使得它们在液体环境中能够快速运动，便于寻找适宜的生存环境和宿主。在生长条件方面，致病性弧菌普遍对盐度有一定要求，多数可在含3%-7%氯化钠的培养基中良好生长，且生长温度范围一般在20-40°C，其中30-37°C通常为最适生长温度。此外，它们对营养物质的需求相对较为简单，在普通营养琼脂培养基上即可生长。然而，不同菌种在对特定营养成分的偏好、耐盐极限以及对温度变化的适应能力等方面存在细微差别。例如，副溶血弧菌是一种嗜盐性弧菌，在含3%氯化钠的培养基中生长最佳，对温度和盐度的变化较为敏感；而霍乱