核酸的分离与检测.pptxVIP

Chapter3Separ;从哪儿提取（Where）？怎么;核酸提取的原则和基本要求核酸提;核酸提取的原则和基本要求;Principleands;核酸提取的一般过程;Principleands;机械方法：超声波处理法、研磨法;破碎细胞-来源动物：小牛胸腺?;微生物：溶菌酶、SDS裂解。高;1首先使脱氧核糖核蛋白、核糖体;21根据所需核酸的性质和特点除;核酸样品的保存核酸保存的主要条;关键试剂的作用;降低温度，改变pH及盐的浓度，;关键试剂的作用核酸酶的抑制和抑;关键试剂的作用核酸制备中常用的;关键试剂的作用核酸制备中常用的;DNase01.RNase01;核酸的部分特征;存在形式pH值影响盐影响温度影;RNA和核苷酸的纯品都呈白色粉;DNA在水中为10g/L，呈黏;DNP在低浓度盐溶液中，几乎不;高温变性低温复性——沸水浴法（;核酸的常用提取方法;常用的DNA提取方法DCBA浓;原理：利用RNP和DNP在电;注意以稀盐酸溶液提取DNA时;2.阴离子去污剂法用SDS或二;苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了;利用核酸溶解于水的性质,将组织;5.沸水浴法（提取大肠杆菌质粒;5.沸水浴法（提取大肠杆菌质粒;6.碱变性法原理：碱变性抽提质;核酸提取的经典案例;碱变性法制备大肠杆菌质粒DNA;6.碱变性法（制备大肠杆菌质粒;6.碱变性法（制备大肠杆菌质粒;溶液I：D-Glucose?;02葡萄糖：增加溶液的粘度，维;EDTA的存在，有利于溶菌酶的;溶液Ⅱ--NaOH-SDS液;溶解细胞膜上的脂质与蛋白，因而;溶液Ⅲ--3MOL/L?NaA;1大肠杆菌传一代后30ml液体;010203040506取上清;CTAB(十六烷基三乙基溴化铵;无标题;在2mL离心管中，加入500μ;3加等体积的氯仿/异戊醇，轻轻;核酸提取的注意事项好使用新鲜材;材料应适量，过多会影响裂解，导;采用有机（酚/氯仿）抽提时应充;注意事项（沉淀、溶解）当沉淀时;核酸提取的常见问题与对策;常见问题与对策DNA中含有蛋白;问题与对策材料不新鲜或反复冻融;问题与对策实验材料不佳或量少破;核酸提取的相关说明;为什么用无水乙醇沉淀DNA?在;乙醇的优点：可以任意比和水相混;在用无水乙醇沉淀DNA时，为什;加进去的Rnase本身是一种蛋;为什么在保存或抽提DNA过程中;如何选择聚乙二醇(6000)的;抽提DNA去除蛋白质时,怎样使;在去除蛋白质的作用中,各有利弊;为什么??酚与氯仿抽提DNA时,;为什么要用pH8的Tris水溶;01.传统的分离方法是用oli;logo用纤维素纯化poly(;Chapter3-2How;Methods分光光度法二苯胺;原理：构成核酸的嘌呤和嘧啶环的;二苯胺法测定DNA含量DNA;21核酸经浓硫酸或高氯酸高温水;定磷法测定DNA在过量（NH4;电泳检测法原理：琼脂糖是一种直;电泳检测法迁移率与下列因素有关;核酸分子的大小：在相同的条件下;凝胶电泳，DNA移动距离和分子;提纯和未提纯质粒DNA电泳图;迁移率与电泳条件的关系低电压时;浓度越大，迁移率越低，当样品的;迁移率与琼脂糖浓度的关系;材料1、DNA样品样品A：λD;缓冲溶液配制表缓冲溶液工作溶液;无标题;选择孔径适宜的点样板（梳板）。;实验步骤6、按以下混;无标题;01化乙啶是一种强诱变剂，并有;无标题;Questions基因工程：第;GAMEISOVER.基因